Можно ли для теста на определение фруктозы (Fructose test) использовать замороженные / размороженные образцы семенной плазмы?

Да, можно. Лучше всего центрифугировать образец спермы перед замораживанием семенной плазмы при -18 °C или ниже.

Есть ли положительный контроль для теста на определение фруктозы (Fructose test)?

Нет, необходимо делать свой раствор фруктозы для теста на определение фруктозы (Fructose test).

Может ли для тестов Fructose, Citric Acid использовать простатическую жидкость?

Количество фруктозы в простатической жидкости, скорее всего, будет незначительным. Для теста Citric Acid может использоваться простатическая жидкость, но может потребоваться разведение образца.

Каковы нормальные значения фруктозы в моче после ретроградной эякуляции?

Набор для этой цели не был валидирован.

Какая скорость и время центрифугирования требуется для тестов EpiScreen / Citric / Fructose?

1000 g / 1500 g в течение 10 минут.

Какой тип фотометра необходимо использовать для тестов EpiScreen Plus, Citric, Fructose?

Марка и тип не важны, важно, чтобы можно было проводить измерение в микротитровальном планшете и были необходимые фильтры.

Можем ли мы использовать для тест Citric и Fructose кюветы 200 мкл?

Да.

Можно ли использовать тест на определение фруктозы в качестве качественного теста?

Для этого теста требуется спектрофотометр, мы не считаем, что изменение цвета достаточно яркое, чтобы использовать его исключительно на основе визуальной оценки.

Тест на содержание нейтральной альфа-глюкозидазы в семенной плазме EpiScreen Plus

Является ли метод EpiScreen Plus идентичным методу ВОЗ?

Мы внесли некоторые существенные изменения в продукт: А) Метод ВОЗ использует кастаноспермин для коррекции фона. Кастаноспермин заменен глюкозой, которую можно хранить при комнатной температуре (против -20 °C) и которая имеет гораздо большую стабильность. В) Проблемы с растворимостью с одним из буферов, описанными в руководстве ВОЗ, были решены, что привело к получению очень стабильного и надежного продукта.

Можем ли мы измерить образцы с помощью спектрофотометра, используя кюветы?

Да, возможно, но есть одно важное различие между приборами: нужно учитывать, что длина пути кювет больше (чаще всего 1 см), чем у микротитровальных планшетов (обычно 0,5 см). Согласно закону Ламберта-Беера (коэффициент поглощения = коэффициент экстинкции х длина пути × концентрация) оптическая плотность (ОП) будут примерно в 2 раза выше. Поэтому самые высокие стандарты 4-нитрофенола будут находиться вне диапазона измерения спектрофотометра. Однако, исходя из нашего опыта, линейность стандартной кривой может быть гарантирована до 100 мкМ. Эта концентрация соответствует активности нейтральной форме фермента 47,9 мМЕ/мл, которая превышает предельную величину. Если активность выше 47,9 мМЕ/мл, мы рекомендуем разбавить и повторно протестировать образец.

Можем ли мы использовать обычный инкубатор для анализа?

Образцы должны быть инкубированы при 37 °C, чтобы обеспечить оптимальную активность фермента. Поэтому мы советуем использовать термошейкер или ванну с теплой водой, где образцы находятся в непосредственном контакте с нагретой средой. Для этой цели не подходит стандартный инкубатор клеточных культур, поскольку перенос тепла через воздух происходит медленнее, что приводит к субоптимальным условиям реакции.

Нужно ли строить стандартную кривую для каждого теста?

Да.

Как вычислять значение альфа-глюкозидазы?

Нами разработан и опубликован шаблон MS Excel ™ для автоматической обработки данных.

Есть ли контроли для набора EpiScreen Plus?

Можно купить альфа-глюкозидазу или мальтазу производства Sigma.

Нужна ли контрольная проба для каждого образца спермы в наборе EpiScreen Plus?

Да.

Может ли для тестов EpiScreen Plus, Citric Acid и Fructose использовать замороженную / размороженную сперму (центрифугирование после замораживания / размораживания)?

Да.

Каков срок годности EpiScreen Plus после открытия?

Не влияет на срок хранения, если продукт правильно используется.