ООО "Селл Диагностик"

EngАдрес офиса: 220040, г. Минск, ул.Некрасова, д.35, корп. 1, пом. 1Н Пн.-Пт.: 09:00 - 18:00

+375 29 3 911 690

Часто задаваемые вопросы FertiPro

Тест на определение антиспермальных антител к IgA в сперме SpermMar Test IgA

Вопрос 1: Можно ли (и необходимо ли) проводить непрямой тест SpermMar Test IgA?
Нет, непрямой тест проводить не следует. Проведение непрямого теста SpermMar Test IgA следует рассматривать в качестве экспериментальной методики, и клиническое значение получаемых результатов не было достоверно установлено

Вопрос 2: Можно ли проводить тест SpermMar Test IgA на отмытых сперматозоидах?
Мы не рекомендуем отмывать сперматозоиды до проведения прямого теста SpermMar Test IgA по нескольким причинам: 1) некоторые среды для промывки сперматозоидов содержат сывороточный альбумин человека (САЧ). САЧ имеет тенденцию к образованию «экрана» вокруг сперматозоидов, который скрывает антитела таким образом, что они не могут быть выявлены с помощью теста; 2) промывка образца спермы приведет к удалению большей части антител, которые могут присутствовать в семенной плазме, что приведет к ложно-отрицательному результату теста.

Вопрос 3: Мы проводим анализ с помощью теста SpermMar Test IgG, следует ли нам также выполнять анализ с помощью теста SpermMar Test IgA?
Некоторые лаборатории в рутинном скрининге используют только тест SpermMar Test IgG, а в случае положительного результата на IgG они проводят анализ и на IgA. Тем не менее, в некоторых случаях пациент с отрицательным результатом на IgG является положительным на IgA.
Таким образом, с клинической точки зрения рекомендуется проводить анализ как с помощью теста SpermMar Test IgG, так и с SpermMar Test IgA. С экономической точки зрения возможен подход с использованием рутинного скрининга только на IgG и проведением теста на IgA в случае положительного результата на IgG.

Вопрос 4: Почему набор SpermMar Test IgG содержит 2 флакона, а SpermMar Test IgA – только 1?
Набор SpermMar Test IgG содержит 1 флакон латексных частиц, покрытых IgG, и 1 флакон анти-IgG антисыворотки. Антисыворотка связывает антитела на поверхности сперматозоида с антителами на поверхности латексных частиц.
Набор SpermMar Test IgA содержит 1 флакон латексных частиц, покрытых моноклональными анти-IgA антителами, напрямую связывающими латексные частицы с антителами на поверхности сперматозоида. Таким образом, в данном наборе требуется лишь 1 флакон реагента, в то время как для набора SpermMar Test IgG требуется 2 флакона.

Вопрос 5: Поставляете ли вы положительные или отрицательные контроли для набора SpermMar Test IgA?
Нет. Тест SpermMar IgA является прямым и проводится на сперматозоидах, возможность поставки контрольных подвижных сперматозоидов отсутствует. Положительные и отрицательные контроли для набора SpermMar IgG содержат плазму, и могут храниться на протяжении длительного времени.

Вопрос 6: В Руководстве ВОЗ указано, что для теста SpermMar Test IgA и SpermMar Test IgG нужно использовать 3,5 мкл реагента, в то время как в ваших инструкциях по применению тестов указано 10 мкл.
Компания FertiPro всегда рекомендовала использовать объем реагента 10 мкл. В Руководстве ВОЗ объем реагента изменен по собственной инициативе авторов. Имеются существенные сомнения, что столь малые объемы реагента (3,5 мкл) обеспечат воспроизводимые и валидные результаты и хорошее смешивание с образцом. Использование 10 мкл реагенты позволяет сохранять объем препарата, обеспечивающий условия для свободного перемещения сперматозоидов.

Вопрос 7: Снижается ли срок годности реагентов SpermMar Test IgA после вскрытия флакона?
Нет, вскрытие (начало использования) реагентов не снижает срок годности. Набор годен в течение всего времени, указанного на этикетке и пачке реагентов.

Вопрос 8: В течение какого времени после забора образца необходимо провести его анализ в тесте SpermMar Test IgA?
Настоятельно рекомендуется проведение анализа образца в течение не более 1-2 часов после забора. В случае, если подвижность сперматозоидов высока, возможно проведение теста в течение 3-4 часов после забора, однако, наличие антиспермальных антител в образце способствует снижению подвижности сперматозоидов.

Вопрос 9: Как хранить образец спермы после забора и до проведения анализа?
Необходимо избегать теплового шока (для поддержания подвижности сперматозоидов). Предпочтительно хранить образец спермы до анализа при температуре 37 °С.

Вопрос 10: Готовы ли реагенты, поставляемые в наборе SpermMar Test IgA, к использованию?
Да, реагенты готовы к использованию. Латексные частицы необходимо перемешать на вихревой мешалке непосредственно перед использованием для получения гомогенной суспензии. Также реагенты должны достичь комнатной температуры до использования (смешивания с образцом) во избежание температурного шока.

Вопрос 11: Какова должна быть температура предметного стекла при проведении теста SpermMar Test IgA?
Комнатная температура.

Вопрос 12: Образец спермы обладает патологической вязкостью. Как отобрать 10 мкл образца для проведения теста SpermMar Test IgA?
Если концентрация и подвижность сперматозоидов в вязком образце являются нормальными: добавьте равный объем среды FertiCult Flushing medium (без альбумина!) (обратитесь к нам по вопросу поставки данной среды), аккуратно перемешайте пипетированием и используйте 10 мкл для теста SpermMar IgA.
Если концентрация и подвижность сперматозоидов в вязком образце являются очень низкими: сконцентрируйте образец центрифугированием, удалите супернатант (семенную плазму) и ресуспендируйте осадок в небольшом объеме среды FertiCult Flushing medium (без альбумина!). Затем используйте 10 мкл отмытых сперматозоидов для теста SpermMar IgA.
Потенциально вязкость образца можно снизить путем механической обработки (осторожное пропускание через шприц с иглой 18G или 19G), но такая обработка может значительно снизить подвижность сперматозоидов.

Вопрос 13: Концентрация сперматозоидов в образце настолько велика, что сложно быстро подсчитать 100 сперматозоидов.
Образец спермы можно разбавить средой FertiCult Flushing medium (без альбумина!).

Вопрос 14: В Руководстве ВОЗ рекомендовано при проведении теста подсчитывать 200 подвижных сперматозоидов, а в инструкции по применению набора FertiPro – 100 сперматозоидов.
При разработке теста мы валидировали его характеристики (в т.ч. пригодности и воспроизводимость) при подсчете 100 сперматозоидов; также подсчет 100 сперматозоидов существенно облегчает работу специалистов клинико-диагностических лабораторий.

Вопрос 15: Можно ли проводить тест SpermMar IgA на замороженных/размороженных образцах спермы?
Тест SpermMar IgA можно проводить на надлежащим образом замороженных в жидком азоте и размороженных сперматозоидах. Тем не менее, данная процедура может снизить подвижность и жизнеспособность сперматозоидов, что отразится на результатах теста SpermMar IgA. Также, если в среде для замораживания присутствует альбумин, это может повлиять на результаты теста.

Вопрос 16: Можно ли проводить тест SpermMar IgA на цервикальной слизи?
Нет, тест SpermMar IgA не может использоваться для непрямого МАР-теста. При необходимости анализа цервикальной слизи используйте тест SpermMar IgG.

Вопрос 17: Набор реагентов SpermMar IgA оставили на столе в лаборатории на выходные. Можно ли использовать набор?
Да. Реагенты набора SpermMar IgA могут храниться до 5 суток при температуре до 37 °С без снижения срока годности.

Вопрос 18: Можно ли оставить набор SpermMar IgA на столе в лаборатории на несколько часов при проведении анализа образцов?
Да, на время проведения анализов реагенты можно хранить при комнатной температуре.

Вопрос 19: Можно ли использовать набор SpermMar IgA для анализа семенной плазмы?
Нет, проведение анализа на семенной плазме не рекомендуется, поскольку не доказана эффективность/значимость такого анализа.

Вопрос 20: Можно ли отобрать аликвоты реагента SpermMar IgA в пластиковые пробирки (пробирки Эппендорфа)?
Нет, стабильность реагента значительно ухудшится.

Вопрос 21: Как правильно подсчитать результаты связывания с латексными частицами в тесте?
— Подсчитывать необходимо только подвижные сперматозоиды
— положительными на антиспермальные антитела считаются сперматозоиды, связанные с латексными частицами любой частью, кроме самого кончика жгутика
— с 1 сперматозоидом может связываться большое количество латексных частиц. Положительными на антиспермальные антитела считаются сперматозоиды, с которыми связано 2 и более латексных частиц

Вопрос 22: Образец спермы обладает крайне низкой концентрацией сперматозоидов/низкой подвижностью. Как поступать в таком случае?
При выявлении образца спермы с крайне низкой концентрацией сперматозоидов/низкой подвижностью, рекомендуется:
a. Удостовериться, что сбор образца осуществлен правильно (температура хранения, время хранения до анализа).
b. Собрать новый образец спермы через несколько недель (простуда или иное заболевание может существенно влиять на качество спермы) и повторить анализ
c. Провести дополнительный полный анализ образца спермы в соответствии с руководством ВОЗ:
— Микроскопическое исследование: много ли круглых клеток? Если да, определить концентрацию пероксидаз-положительных белых клеток крови (тест LeucoScreen). Данные клетки оказывают негативное влияние на качество спермы из-за окислительного стресса, что может быть причиной низкой подвижности сперматозоидов.
— Определить жизнеспособность сперматозоидов (напр., тест VitalScreen)
— Провести непрямой МАР-тест на IgG (SpermMar Test IgG)
— Исследовать морфологию сперматозоидов (тест Spermac Stain)
— Измерить содержание маркеров придаточных желез, в особенности альфа-глюкозидазы (индикатор патологии эпидидимуса) – тест EpiScreen Plus

Тест на определение антиспермальных антител к IgG в сперме SpermMar Test IgG

Вопрос 1: Можно ли проводить тест SpermMar Test IgG на отмытых сперматозоидах?
Мы не рекомендуем отмывать сперматозоиды до проведения прямого теста SpermMar Test IgG по нескольким причинам: 1) некоторые среды для промывки сперматозоидов содержат сывороточный альбумин человека (САЧ). САЧ имеет тенденцию к образованию «экрана» вокруг сперматозоидов, который скрывает антитела таким образом, что они не могут быть выявлены с помощью теста; 2) промывка образца спермы приведет к удалению большей части антител, которые могут присутствовать в семенной плазме, что приведет к ложно-отрицательному результату теста.

Вопрос 2: Мы проводим анализ с помощью теста SpermMar Test IgG, следует ли нам также выполнять анализ с помощью теста SpermMar Test IgA?
Некоторые лаборатории в рутинном скрининге используют только тест SpermMar Test IgG, а в случае положительного результата на IgG они проводят анализ и на IgA. Тем не менее, в некоторых случаях пациент с отрицательным результатом на IgG является положительным на IgA.
Таким образом, с клинической точки зрения рекомендуется проводить анализ как с помощью теста SpermMar Test IgG, так и с SpermMar Test IgA. С экономической точки зрения возможен подход с использованием рутинного скрининга только на IgG и проведением теста на IgA в случае положительного результата на IgG.

Вопрос 3: Почему набор SpermMar Test IgG содержит 2 флакона, а SpermMar Test IgA – только 1?
Набор SpermMar Test IgG содержит 1 флакон латексных частиц, покрытых IgG, и 1 флакон анти-IgG антисыворотки. Антисыворотка связывает антитела на поверхности сперматозоида с антителами на поверхности латексных частиц.
Набор SpermMar Test IgA содержит 1 флакон латексных частиц, покрытых моноклональными анти-IgA антителами, напрямую связывающими латексные частицы с антителами на поверхности сперматозоида. Таким образом, в данном наборе требуется лишь 1 флакон реагента, в то время как для набора SpermMar Test IgG требуется 2 флакона.

Вопрос 4: Иногда при проведении теста SpermMar Test IgG в нашей лаборатории сперматозоиды утрачивают подвижность через 15 минут после смешивания реагентов с образцом. Нормально ли это?
Да. После смешивания реагентов с образцом спермы необходимо подождать 3 минуты до подсчета результатов. Не следует ждать более 5 минут

Вопрос 5: При проведении теста SpermMar Test IgG латексные частицы связываются (агрегируют) между собой. Нормально ли это?
Да. Принцип такого эффекта описан в Вопросе 3: антисыворотка связывает латексные частицы не только со сперматозоидами, но и с другими латексными частицами, также содержащими IgG. Это приводит к тенденции латексных частиц к агрегации.
Другой причиной агрегации может быть недостаточно хорошее перемешивание содержимого флакона с латексными частицами до использования в тесте. Также следует обеспечить хорошее перемешивание антисыворотки, латексных частиц и спермы на предметном стекле.

Вопрос 6: Поставляете ли вы положительные или отрицательные контроли для набора SpermMar Test IgG?
Да. Контроли поставляются готовыми к использованию и могут использоваться в непрямом тесте SpermMar Test IgG.

Вопрос 7: Можно ли проводить непрямой тест SpermMar IgG на замороженных/размороженных образцах семенной плазмы?
Да. Рекомендуется провести центрифугирование необработанного (нативного) образца спермы до замораживания семенной плазмы при -18 °С и ниже.

Вопрос 8: В Руководстве ВОЗ указано, что для теста SpermMar Test IgA и SpermMar Test IgG нужно использовать 3,5 мкл реагента, в то время как в ваших инструкциях по применению тестов указано 10 мкл.
Компания FertiPro всегда рекомендовала использовать объем реагента 10 мкл. В Руководстве ВОЗ объем реагента изменен по собственной инициативе авторов. Имеются существенные сомнения, что столь малые объемы реагента (3,5 мкл) обеспечат воспроизводимые и валидные результаты и хорошее смешивание с образцом. Использование 10 мкл реагенты позволяет сохранять объем препарата, обеспечивающий условия для свободного перемещения сперматозоидов.

Вопрос 9: Снижается ли срок годности реагентов SpermMar Test IgG после вскрытия флакона?
Нет, вскрытие (начало использования) реагентов не снижает срок годности. Набор годен в течение всего времени, указанного на этикетке и пачке реагентов.

Вопрос 10: В течение какого времени после забора образца необходимо провести его анализ в тесте SpermMar Test IgG?
Настоятельно рекомендуется проведение анализа образца в течение не более 1-2 часов после забора. В случае, если подвижность сперматозоидов высока, возможно проведение теста в течение 3-4 часов после забора, однако, наличие антиспермальных антител в образце способствует снижению подвижности сперматозоидов.

Вопрос 11: Как хранить образец спермы после забора и до проведения анализа?
Необходимо избегать теплового шока (для поддержания подвижности сперматозоидов). Предпочтительно хранить образец спермы до анализа при температуре 37 °С.

Вопрос 12: Готовы ли реагенты, поставляемые в наборе SpermMar Test IgG, к использованию?
Да, реагенты готовы к использованию. Латексные частицы необходимо перемешать на вихревой мешалке непосредственно перед использованием для получения гомогенной суспензии. Также реагенты должны достичь комнатной температуры до использования (смешивания с образцом) во избежание температурного шока.

Вопрос 13: Какова должна быть температура предметного стекла при проведении теста SpermMar Test IgG?
Комнатная температура.

Вопрос 14: Образец спермы обладает патологической вязкостью. Как отобрать 10 мкл образца для проведения теста SpermMar Test IgG?
Если концентрация и подвижность сперматозоидов в вязком образце являются нормальными: добавьте равный объем среды FertiCult Flushing medium (без альбумина!) (обратитесь к нам по вопросу поставки данной среды), аккуратно перемешайте пипетированием и используйте 10 мкл для теста SpermMar IgG.
Если концентрация и подвижность сперматозоидов в вязком образце являются очень низкими: сконцентрируйте образец центрифугированием, удалите супернатант (семенную плазму) и ресуспендируйте осадок в небольшом объеме среды FertiCult Flushing medium (без альбумина!). Затем используйте 10 мкл отмытых сперматозоидов для теста SpermMar IgG.
Потенциально вязкость образца можно снизить путем механической обработки (осторожное пропускание через шприц с иглой 18G или 19G), но такая обработка может значительно снизить подвижность сперматозоидов.

Вопрос 15: Концентрация сперматозоидов в образце настолько велика, что сложно быстро подсчитать 100 сперматозоидов.
Образец спермы можно разбавить средой FertiCult Flushing medium (без альбумина!).

Вопрос 16: В Руководстве ВОЗ рекомендовано при проведении теста подсчитывать 200 подвижных сперматозоидов, а в инструкции по применению набора FertiPro – 100 сперматозоидов.
При разработке теста мы валидировали его характеристики (в т.ч. пригодности и воспроизводимость) при подсчете 100 сперматозоидов; также подсчет 100 сперматозоидов существенно облегчает работу специалистов клинико-диагностических лабораторий.

Вопрос 17: Можно ли проводить тест SpermMar IgG на цервикальной слизи?
Да, тест SpermMar IgG может использоваться для непрямого МАР-теста на цервикальной слизи. Для проведения такого теста Вам понадобятся положительный и отрицательный контроли для МАР-теста.

Вопрос 18: Набор реагентов SpermMar IgG оставили на столе в лаборатории на выходные. Можно ли использовать набор?
Да. Реагенты набора SpermMar IgG могут храниться до 5 суток при температуре до 37 °С без снижения срока годности.

Вопрос 19: Можно ли оставить набор SpermMar IgG на столе в лаборатории на несколько часов при проведении анализа образцов?
Да, на время проведения анализов реагенты можно хранить при комнатной температуре.

Вопрос 20: Можно ли отобрать аликвоты реагентов SpermMar IgG в пластиковые пробирки (пробирки Эппендорфа)?
Нет, стабильность реагентов значительно ухудшится.

Вопрос 21: Как правильно подсчитать результаты связывания с латексными частицами в тесте?
— Подсчитывать необходимо только подвижные сперматозоиды
— положительными на антиспермальные антитела считаются сперматозоиды, связанные с латексными частицами любой частью, кроме самого кончика жгутика
— с 1 сперматозоидом может связываться большое количество латексных частиц. Положительными на антиспермальные антитела считаются сперматозоиды, с которыми связано 2 и более латексных частиц

Вопрос 22: Образец спермы обладает крайне низкой концентрацией сперматозоидов/низкой подвижностью. Как поступать в таком случае?
При выявлении образца спермы с крайне низкой концентрацией сперматозоидов/низкой подвижностью, рекомендуется:
a. Удостовериться, что сбор образца осуществлен правильно (температура хранения, время хранения до анализа).
b. Собрать новый образец спермы через несколько недель (простуда или иное заболевание может существенно влиять на качество спермы) и повторить анализ
c. Провести дополнительный полный анализ образца спермы в соответствии с руководством ВОЗ:
— Микроскопическое исследование: много ли круглых клеток? Если да, определить концентрацию пероксидаз-положительных белых клеток крови (тест LeucoScreen). Данные клетки оказывают негативное влияние на качество спермы из-за окислительного стресса, что может быть причиной низкой подвижности сперматозоидов.
— Определить жизнеспособность сперматозоидов (напр., тест VitalScreen)
— Провести непрямой МАР-тест на IgG (SpermMar Test IgG)
— Исследовать морфологию сперматозоидов (тест Spermac Stain)
— Измерить содержание маркеров придаточных желез, в особенности альфа-глюкозидазы (индикатор патологии эпидидимуса) – тест EpiScreen Plus

Вопрос 23: Образец спермы обладает крайне низкой концентрацией сперматозоидов/низкой подвижностью. Как поступать в таком случае?
При выявлении образца спермы с крайне низкой концентрацией сперматозоидов/низкой подвижностью, рекомендуется:

Положительный и отрицательный контроли для MAR-теста SpermMar Test IgG

Предоставляете ли вы положительный или отрицательный контроль для теста SpermMar IgG?

Да. Контроли разведены и могут быть использованы непосредственно из флакона.

Можно ли использовать что-нибудь, кроме EBSS, для постановки SpermMar IgG теста?

Может быть использована любая культуральная среда с нейтральным pH и без сывороточного альбумина человека (например ФСБ).

Содержит ли контрольная сыворотка SpermMar IgG теста антиспермальные антитела?

Она содержит плазму пациента, у которого определяется положительный результат непрямого MAR теста.

Тест на содержание лимонной кислоты в семенной плазме Citric Acid Test

Можно ли для тестов на определение фруктозы (Fructose), лимонной кислоты (Citric Acid) использовать простатическую жидкость?

Для теста на определение лимонной кислоты (Citric Acid Test) можно использовать простатическую жидкость, но может потребоваться разведение образца.

Можно ли для тестов на определение нейтральной альфа-глюкозидазы (EpiScreen Plus), лимонной кислоты (Citric Acid) и фруктозы (Fructose) использовать замороженные / размороженные образцы спермы (центрифугирование после замораживания / оттаивания)?

Да.

Какой тип фотометра необходимо использовать для тестов на определение нейтральной альфа-глюкозидазы (EpiScreen Plus), лимонной кислоты (Citric Acid) и фруктозы (Fructose)?

Марка и тип не важны, важно, чтобы можно было проводить измерения в микротитровальных планшетах и были необходимые фильтры.

Можно ли для теста на лимонную кислоту и фруктозу использовать фотометрические кюветы 200 мкл?

Да.

Тест на содержание фруктозы в семенной плазме Fructose Test

Можно ли для теста на определение фруктозы (Fructose test) использовать замороженные / размороженные образцы семенной плазмы?

Да, можно. Лучше всего центрифугировать образец спермы перед замораживанием семенной плазмы при -18 °C или ниже.

Есть ли положительный контроль для теста на определение фруктозы (Fructose test)?

Нет, необходимо делать свой раствор фруктозы для теста на определение фруктозы (Fructose test).

Может ли для тестов Fructose, Citric Acid использовать простатическую жидкость?

Количество фруктозы в простатической жидкости, скорее всего, будет незначительным. Для теста Citric Acid может использоваться простатическая жидкость, но может потребоваться разведение образца.

Каковы нормальные значения фруктозы в моче после ретроградной эякуляции?

Набор для этой цели не был валидирован.

Какая скорость и время центрифугирования требуется для тестов EpiScreen / Citric / Fructose?

1000 g / 1500 g в течение 10 минут.

Какой тип фотометра необходимо использовать для тестов EpiScreen Plus, Citric, Fructose?

Марка и тип не важны, важно, чтобы можно было проводить измерение в микротитровальном планшете и были необходимые фильтры.

Можем ли мы использовать для тест Citric и Fructose кюветы 200 мкл?

Да.

Можно ли использовать тест на определение фруктозы в качестве качественного теста?

Для этого теста требуется спектрофотометр, мы не считаем, что изменение цвета достаточно яркое, чтобы использовать его исключительно на основе визуальной оценки.

Тест на содержание нейтральной альфа-глюкозидазы в семенной плазме EpiScreen Plus

Является ли метод EpiScreen Plus идентичным методу ВОЗ?

Мы внесли некоторые существенные изменения в продукт: А) Метод ВОЗ использует кастаноспермин для коррекции фона. Кастаноспермин заменен глюкозой, которую можно хранить при комнатной температуре (против -20 °C) и которая имеет гораздо большую стабильность. В) Проблемы с растворимостью с одним из буферов, описанными в руководстве ВОЗ, были решены, что привело к получению очень стабильного и надежного продукта.

Можем ли мы измерить образцы с помощью спектрофотометра, используя кюветы?

Да, возможно, но есть одно важное различие между приборами: нужно учитывать, что длина пути кювет больше (чаще всего 1 см), чем у микротитровальных планшетов (обычно 0,5 см). Согласно закону Ламберта-Беера (коэффициент поглощения = коэффициент экстинкции х длина пути × концентрация) оптическая плотность (ОП) будут примерно в 2 раза выше. Поэтому самые высокие стандарты 4-нитрофенола будут находиться вне диапазона измерения спектрофотометра. Однако, исходя из нашего опыта, линейность стандартной кривой может быть гарантирована до 100 мкМ. Эта концентрация соответствует активности нейтральной форме фермента 47,9 мМЕ/мл, которая превышает предельную величину. Если активность выше 47,9 мМЕ/мл, мы рекомендуем разбавить и повторно протестировать образец.

Можем ли мы использовать обычный инкубатор для анализа?

Образцы должны быть инкубированы при 37 °C, чтобы обеспечить оптимальную активность фермента. Поэтому мы советуем использовать термошейкер или ванну с теплой водой, где образцы находятся в непосредственном контакте с нагретой средой. Для этой цели не подходит стандартный инкубатор клеточных культур, поскольку перенос тепла через воздух происходит медленнее, что приводит к субоптимальным условиям реакции.

Нужно ли строить стандартную кривую для каждого теста?

Да.

Как вычислять значение альфа-глюкозидазы?

Нами разработан и опубликован шаблон MS Excel ™ для автоматической обработки данных.

Есть ли контроли для набора EpiScreen Plus?

Можно купить альфа-глюкозидазу или мальтазу производства Sigma.

Нужна ли контрольная проба для каждого образца спермы в наборе EpiScreen Plus?

Да.

Может ли для тестов EpiScreen Plus, Citric Acid и Fructose использовать замороженную / размороженную сперму (центрифугирование после замораживания / размораживания)?

Да.

Каков срок годности EpiScreen Plus после открытия?

Не влияет на срок хранения, если продукт правильно используется.

Тест на содержание нейтральной альфа-глюкозидазы в семенной плазме EpiScreen Plus
Морфология сперматозоидов – тест Spermac Stain

Вопрос: На какое количество анализов рассчитан набор Spermac Stain?

Набор красителей во флаконах объемом 50 мл (SPS050) рассчитан на 120-200 мазков, в зависимости от интенсивности использования, времени использования и условий хранения (защита от испарения).

Вопрос: Какова причина смещения критерия «нормальности» морфологии сперматозоидов от 14% к 4% в последнем издании руководства ВОЗ?

В прошлом тератозооспермия обычно диагностировалась при наличии <30% морфологически нормальных сперматозоидов в образце спермы (по руководству ВОЗ) или при наличии <15% (по строгим критериям).

В отличии от 4-го издания руководства ВОЗ, в 5-м издании референтные значения основаны на результатах большого исследования (референтная популяция: отцы, более 1600 пар, несколько центров на разных континентах). Также более ранние издания руководства ВОЗ приводили «нормальные значения», в то время как в 5-м издании приведены «нижние референтные значения». Нельзя отрицать, что в последнее время наблюдается тенденция ухудшения морфологических показателей спермы, что может быть объяснено 3 различными причинами:

  • Более строгое применение критериев оценки (ранее пограничные сперматозоиды рассматривались в качестве нормальных, в то время как сейчас они считаются аномальными)
  • Более высокая частота выявления (больший процент) мужчин, обладающих пониженным (плохим) репродуктивным здоровьем, как следствие влияния факторов окружающей среды (воздействие псевдоэстрогенов, токсичная окружающая среда, профессиональные вредные факторы, более высокая частота ЗППП, которые индуцируют лейкоцитоспермию и повышение повреждений ДНК).
  • Дополнительные параметры морфологической аномальности сперматозоидов, что приводит к классификации большего числа форм в качестве «аномальных».

Вопрос: Какова стандартная практика в (большинстве) европейских лабораторий: используют ли они 4%, или предпочитают использовать 14%?

В соответствии с ежегодным отчетом, публикуемым WIV (Бельгийский научный институт общественного здоровья), 85 из 105 бельгийских андрологических лабораторий применяют руководство ВОЗ 2010 года (5-е издание). Это означает, что 20 лабораторий используют иные критерии: 7 из них используют 15% в качестве пограничного значения, 8 – используют 14%, 1 – 10%, 1 -5%, 1 – 3.9%, 2 – 3% в качестве пограничного значения.

4% является нижним референтным значением. Во время конференции ESHRE 2016 (в рамках семинаров по андрологии и мужскому бесплодию) было отмечено, что многие центры применяют следующую классификацию (которую можно рекомендовать для применения и в РБ):

0-4% — плохой прогноз
4-14% — хороший прогноз
>14% — морфологически нормальная сперма

Вопрос: Каково дерево принятия решений для врача при получении результатов морфологической оценки спермы?

Анализ спермы сам по себе не может прогнозировать фертильность (существует множество относящихся к женщине факторов, независимых от спермы, а также много иных независимых факторов, например, время проведения полового акта по отношению к овуляции). Анализ спермы информативен в отношении проблем мужского репродуктивного здоровья, но для прогноза фертильности пары и/или назначения подходящего лечения результаты анализа спермы следует интерпретировать в комбинации с результатами иных анализов спермы и результатами клинических исследований. Морфология сперматозоидов дает, например, следующую информацию:

  • Отсутствие акросомы: структурный дефект -> оплодотворение возможно только через ИКСИ.
  • Скрученный хвост: старение спермы -> пациенту следует более часто иметь половые акты.
  • Коническая форма головки: ассоциировано с тестикулярным стрессом -> необходимо обследование на предмет варикоцеле или выявления причины тестикулярного стресса.
  • Большое количество круглых клетоr, НЕ ЯВЛЯЮЩИХСЯ белыми клетками крови, а сперматидами -> может указывать на слишком короткий период воздержания.

Использование набора для оценки морфологии сперматозоидов Spermac Stain (FertiPro) является значительно менее времязатратным по сравнению со многими другими методиками окрашивания (например, по Папаниколау).

Вопрос: Может ли Spermac Stain помочь определить вакуоли в голове спермы?

В человеческой сперме есть два типа вакуолей, один из которых является нормой как результат расположения ДНК в головке, и его можно увидеть только при электронной микроскопии. Другой тип – это тип, называемый дефектом «диадем». Эти вакуоли обычно расположены в экваториальной области, они могут быть одиночными, но, когда они множественные, они часто находятся на одной линии, напоминающей диадему или корону, окружающую головку.

Вакуоли образуются путем инвагинации ядерной мембраны в ядро и, таким образом, окружены ядерной мембраной. Они могут быть пустыми или заполненными различными цитоплазматическими компонентами, мембранным, зернистым или везикулярным материалом. Эти вакуоли являются патологическими, являясь одним из основных дефектов головки, и они хорошо видны при окраске Spermac Stain, но не другими имеющимися красителями. Их также можно увидеть при фазово-контрастной микроскопии. Лучший способ увидеть их – увеличивать и уменьшать четкость и вакуоль меняет цвет с черного на белый. Данный дефект часто встречается в сочетании с другими дефектами.

Вопрос: Где находиться «экваториальная область» сперматозоида?

Экваториальная область является самой широкой частью головки сперматозоидов, чуть ниже акросомы (у морфологически нормальных сперматозоидах).

Вопрос: Как обрабатывать образцы спермы с патологической вязкостью при подготовке к проведению теста Spermac Stain?

Добавьте к нативному образце спермы равный объем среды FertiCult Flushing medium (среда для промывки сперматозоидов), аккуратно перемешайте пипеткой.
Примечание: разбавление образца спермы средой FertiCult Flushing medium не влияет на окрашивание сперматозоидов при оценке морфологии сперматозоидов с помощью набора Spermac Stain. Использование FertiCult Flushing medium допускается.

Высокая вязкость может препятствовать правильному определению подвижности сперматозоидов, концентрации, определению сперматозоидов, покрытых антителами, и измерению биохимических маркеров. Весь образец спермы обычно разжижается в течение 15 мин при комнатной температуре, хотя редко разжижение может занимать до 60 мин и более.

Отсутствие разжижения может являться признаком недостаточной секреции простатой протеолитических ферментов фибринолизина, фибриногеназы и аминопептидазы. С другой стороны, отсутствие коагуляции может указывать на обструкцию эякуляторного протока или врожденное отсутствие семенных пузырьков. Важно отметить, что разжижение следует отличать от вязкости, поскольку аномалии в вязкости могут быть результатом нарушения функции простаты и / или использования пластикового контейнера неподходящего типа.

Рекомендуется также ознакомиться с рекомендациями Руководства ВОЗ по исследованию и обработке эякулята человека, 2010 г., при планировании и проведении работы с вязкими образцами эякулята.
Альтернативные варианты работы с патологически вязкими неразжижаемыми образцами спермы (в соответствии с Руководством ВОЗ):

1) Добавьте к образцу спермы равный ему объем физиологической среды (фосфатно-солевой буфер, физ.раствор), тщательно пропипетируйте
2) (или) Негомогенность образца может быть снижена путем многократного (6-10 раз) осторожного пропускания образца через шприц с тупой иглой размера 18G или 19G
3) (или) добавление бромелайна, протеолитического фермента с широкой специфичностью. Приготовьте раствор 10 МЕ/мл бромелайна в ФСБ. Бромелайн плохо растворяется, но при перемешивании растворение происходит через 15-20 мин. Разбавьте образец спермы 1:1 раствором 10 МЕ/мл бромелайна, перемешайте наконечником пипетки, инкубируйте при 37°С в течение 10 мин. Тщательно перемешайте образец перед анализом.

Вопрос: Может ли краситель Spermac Stain использоваться для дифференциации лейкоцитов / круглых клеток?

Нет, только для оценки морфологии.

Вопрос: Можно ли использовать Spermac Stain для оценки жизнеспособности сперматозоидов?

Нет, нельзя. Вы должны использовать краситель на основе эозина (тест VitalScreen).

Тест Hypo-osmotic swelling test

Может ли сперма из гипоосмотического теста использована для ИКСИ/ИМСИ?

Продукт не валидировался для данной цели, он является диагностическим.

Как много тестов можно выполнить при использовании HOS теста?

Около 100 тестов.

Какой срок годности у HOS-теста?

12 месяцев.

Можно ли использовать HOS тест для отбора сперматозоидов для проведения в последующем процедуры ИКСИ?

Мы не поддерживаем данное решение, так как мы не тестировали влияние HOS теста на сперматозоиды, это сугубо диагностический тест.

Тест VitalScreen

Как вскрытие набора VitalScreen влияет на его срок годности?

Срок годности VitalScreen остается прежним.

Существует ли положительный/отрицательный контроль на VitalScreen?

Нет, у нас нет таких контролей для этого продукта.

При использовании VitalScreen мы должны подсчитывать все сперматозоиды или только неподвижные?

Должны подсчитываться все сперматозоиды.

Обнаружены какие-то темные капельки в тесте VitalScreen.

Маленький осадок из нигрозина может быть удален путем фильтрования через фильтровальную бумагу.

Существуют ли контрольные предметные стекла для теста VitalScreen?

Нет.

Лучше делать с VitalScreen обычный мазок или покрывать покровным стеклом?

Мы обнаружили, что лучше использовать покровное стекло.

Тест на содержание лейкоцитов в сперме LeucoScreen

В некоторых образцах из-за образования пузырьков практически невозможно под микроскопом проанализировать результаты, что можно сделать, чтобы избежать этого?

Образование пузырьков является частью химической реакции, происходящей между пероксидазой и перекисью водорода. Образование пузырьков коррелирует с количеством пероксидазы, содержащейся в образце. Чтобы минимизировать (избежать) воздействие пузырьков на анализ результатов, накройте покровным стеклом смесь спермы/LeucoScreen как можно скорее после смешивания и сразу подсчитайте результаты.

Необходимо ли считать 20 полей зрения при постановке теста LeucoScreen, так как на подсчет сперматозоидов в 20 полях уходит много времени?

Нет, если концентрация сперматозоидов высока, то можно, например, подсчитать сперматозоиды в 5 полях и лейкоцитов в 20 и умножить число сперматозоидов х4, либо разделить число лейкоцитов /4.

Может ли LeucoScreen использоваться для других биологических образцов кроме спермы?

Может использоваться для мочи и крови, но мы не валидировали набор для этих образцов.

Какой срок хранения LeucoScreen?

12 месяцев.

Сколько тестов можно выполнить с помощью набора LeucoScreen?

Набора хватает для использования в течение 20 дней. В тесте готовится рабочий раствор реагента (его хватает на приготовление 100 образцов для анализа), который остается стабильным в течение 1 рабочего дня. Поставляемых реагентов хватает на приготовление 20 рабочий растворов.

Культивирование эмбрионов

Какова концентрация CO2, рекомендуемая для среды GAIN?

5%

Можно ли использовать GAIN после стадии G3?

Мы не рекомендуем это делать, лучше использовать GAIN с самого начала культивирования.

Каковы преимущества или риски при использовании среды с антибиотиками?

— Получение дополнительного уровня защиты от контаминации.
— Ложное чувство безопасности, ограниченный спектр антибиотиков, аллергия.

Забор ооцитов

Как долго среда FertiCult Aspiration medium стабильна после вскрытия?

В течение 7 дней.

Какая концентрация HEPES в среде FertiCult Aspiration medium?

18 ммоль/л.

Можно ли среду FertiCult Aspiration использовать для отмывания спермы?

Нет.

Базовая среда Sil-Select Stock

Можем ли мы готовить собственные градиенты, используя Sil-Select Stock?

Да, можно. Sil-Select Stock — это исходный изотонический раствор градиента плотности на основе диоксида кремния. Для того, чтобы приготовить Ваши собственные градиенты, просто добавьте достаточное количество среды для культивирования клеток (среды для промывки сперматозоидов), чтобы сделать необходимое разведение.

Следует отметить, что настоятельно рекомендуется использование для разбавления буферной среды HEPES, поскольку использование HCO3-буферизованных сред под воздействием воздуха приводит к растворам с очень неустойчивым pH.

Как долго я могу использовать Sil-Select Stock после вскрытия флакона?

2 фактора ограничивают срок годности продукта после вскрытия флакона:

  • Обмен газами: влияет на рН,
  • Загрязнение жизнеспособными организмами.

Мы проводили тесты на вскрытие флакона наших сред в течение 7 дней и обнаружили, что параметры продукта оставались в пределах установленных требований в течение этого времени, принимая во внимание, что флакон вскрывался в стерильных условиях и среда хранилась при 2-8 ° C после открытия.

Набор градиентов Sil-Select Plus

Содержит ли Sil-Select Plus антибиотики?

Нет.
Если вы хотите добавить антибиотики, мы рекомендуем добавлять 10 мг гентамицина фармацевтического качества на литр среды.

Как долго я могу использовать Sil-Select Plus после вскрытия флакона?

2 фактора ограничивают срок годности продукта после вскрытия флакона:

  • Обмен газами: влияет на рН,
  • Загрязнение жизнеспособными организмами.

Мы проводили тесты на вскрытие флакона наших сред в течение 7 дней и обнаружили, что параметры продукта оставались в пределах установленных требований в течение этого времени, принимая во внимание, что флакон вскрывался в стерильных условиях и среда хранилась при 2-8 °C после открытия.

Можем ли мы сделать собственные градиенты вместо использования градиентов плотности верхнего и нижнего слоев?

Да, можете. Для этого Вам нужно будет заказать Sil-Select Stock вместо Sil-Select Plus.
Обратите внимание, что мы установили, что наши градиенты Sil-Select Plus оптимально подобраны для максимально эффективного отбора сперматозоидов.

Минеральное масло

Определяется ли перекисное число в минеральном масле?

Да, в каждой партии минерального масла FertiCult Mineral Oil проверяется перекисное число и его значение должно быть ниже 0,1 мэкв для реализации продукта для продажи.

Является ли минеральное масло FertiCult парафиновым маслом?

Легкое парафиновое масло является синонимом легкого минерального масла. Минеральное масло FertiCult Mineral Oil представляет собой легкое парафиновое масло фармацевтического класса, которое промывается нами высокоочищенной водой фармацевтического класса. В дополнение к тестированию, описанному в Европейской фармакопее, мы проводим дополнительный и более строгий контроль качества продукта (например, тест на перекисное число).

Какая оптимальная температура хранения минерального масла?

При 15-25 ° C.

Можно ли инкубировать минеральное масло перед использованием в течение ночи?

Да, можно.

Как долго можно использовать минеральное масло после вскрытия?

28 дней.

Каким методом определяется перекисное число в минеральном масле?

Методом потенциометрического титрования.

Производится ли минеральное масло FertiCult во флаконах с закручивающейся крышкой?

Минеральное масло с каталожными номерами продукта, оканчивающимися на «Р», поставляется во флаконах с закручивающейся крышкой.

Вязкая среда для процедур ИКСИ: 10% PVP

Какая крышка у флаконов PVP0.2S?

PVP0.2S поставляется во флаконах с закручивающейся крышкой.

Раствор гиалуронидазы

Что вы используете в качестве источника гиалуронидазы?

Мы используем фармацевтическую гиалуронидазу, полученную из бычьей ткани.

Можно ли перед использованием инкубировать среду с гиалуронидазой в течение ночи?

Мы провели стресс-тест, 5 дней при 37 °C, и среда осталась надлежаще высокого качества.

Замораживание сперматозоидов

Нужно ли добавлять яичный желток в SpermFreeze перед использованием?

Нет. SpermFreeze — это готовая к использованию среда для замораживания, которая не требует каких-либо добавок. Просто следуйте инструкциям, и образец спермы будет безопасно заморожен и разморожен.

Содержит ли SpermFreeze антибиотики?

Нет, SpermFreeze не содержит антибиотиков.
Если Вы считаете, что необходимы антибиотики, мы рекомендуем добавить к продукту 10 мг / л гентамицина фармацевтического качества.

Можно ли использовать SpermFreeze для TESE?

Да, можно, Вам не нужно ничего добавлять, это так же просто, как использование SpermFreeze с эякулированной спермой.

Как долго я могу хранить сперму в замороженном состоянии?

После замораживания при -196 ° С сперму можно хранить в течение 10-20 лет (возможно, даже дольше). Способность к оплодотворению может быть снижена после длительного периода замораживания.
Критической частью процесса замораживания является само замерзание, при котором происходит повреждение клеток. SpermFreeze был специально разработан, чтобы избежать повреждений во время замораживания, однако рекомендуется провести тестовое замораживание образца спермы. Если жизнеспособность и подвижность резко снижаются, попробуйте использовать программируемый протокол замораживания.

Необходимо ли отмывать размороженные образцы перед использованием?

Мы настоятельно рекомендуем промыть образец спермы после размораживания, чтобы удалить глицерин из среды.

Отмечено, что после оттаивания хвосты сперматозоидов скручиваются. Это норма?

Нет, это не норма. Керлинг хвоста происходит из-за осмотического шока в момент добавления SpermFreeze в образец спермы.
Чтобы этого избежать, вы должны медленно, капля за каплей, добавлять среду SpermFreeze, при этом взбалтывая контейнер, содержащий образец спермы. Таким образом, сперматозоиды имеют достаточно времени, чтобы приспособиться к новому осмотическому равновесию.

Какую выживаемость можно ожидать после замораживания / оттаивания?

Количество спермальных клеток, выживших при замораживании, может значительно различаться между образцами.
Тем не менее, исследования замороженных / размороженных проб доноров показали среднюю выживаемость от 65 до 70%. («Выживаемость» была определена как количество подвижных сперматозоидов после размораживания по сравнению к количеству подвижных сперматозоидов до замораживания).

Как долго я могу использовать SpermFreeze после вскрытия флакона?

2 фактора ограничивают срок годности продукта после вскрытия флакона:

  • Обмен газами: влияет на рН,
  • Загрязнение жизнеспособными организмами.

Мы проводили тесты на вскрытие флакона наших сред в течение 7 дней и обнаружили, что параметры продукта оставались в пределах установленных требований в течение этого времени, принимая во внимание, что флакон вскрывался в стерильных условиях и среда хранилась при 2-8 °C после открытия.

Можно ли использовать для размораживания SpermFreeze воду при 37 °C?

Да, можно, размораживание при повышенной температуре будет быстрее, чем в воде при комнатной температуре. Однако это не обязательно.

Почему SpermFreeze содержит человеческий сывороточный альбумин?

Он является стабилизатором клеточной мембраны, препятствует адгезии клеток, и используется практически во всех других средах для замораживания спермы.

Нужно добавлять SpermFreeze к сперме или наоборот?

Нужно добавлять SpermFreeze к сперме.

При использовании разбавленной спермы нужно учитывать начальный объем или конечный объем при добавлении SpermFreeze?

Конечный объем.

Замораживание эмбрионов
Среды для витрификации и оттаивания VitriFreeze/VitriThaw

Почему закрытые системы предпочтительнее открытых систем для витрификации?

Нет никакой разницы между эффективностью витрификации в закрытых и открытых системах. Однако из-за соображений безопасности (контаминация и перекрестная контаминация), закрытые системы являются предпочтительными как для стадии охлаждения, так и для хранения.

Почему существует один шаг оттаивания при витрификации в открытой системе?

Более короткое воздействие криопротекторов во время витрификации, следовательно, оттаивание также может быть выполнено быстрее.

Сколько эмбрионов / процедур может быть выполнено с помощью одного набора для витрификации / оттаивания?

Максимум 4 процедуры и 8 эмбрионов.

На какое количество образцов предназначен набор VitriThaw? Как долго мы можем хранить флакон после открытия?

3-4 образца; 1 неделя.

Среды для витрификации и оттаивания VitriFreeze ES/VitriThaw ES

Есть ли разница между наборами VitriFreeze и VitriFreeze ES?

Первый набор предназначен только для эмбрионов на стадиях бластоцисты и морулы, а второй – для всех стадий.

Почему в наборе ES для закрытых систем есть дополнительный этап оттаивания?

Для закрытых системы требуется более длительное время воздействия, потому что температурный градиент менее крутой во время витрификации. Поэтому требуется больше времени и больше этапов для удаления криопротекторов из эмбрионов и поэтому добавляется дополнительный этап.

Можно ли выполнить витрификацию на стадии 2PN с помощью набора для витрификации VitriFreeze?

Это нежелательно, лучше всего подходит набор VitriFreeze ES или, если это действительно необходимо, можно разбавить Freeze 1, чтобы сделать дополнительный этап замораживания

Нужно ли использовать VitriThaw ES 1 для оттаивания в открытой системе?

Нет, он используется только для закрытых систем

Может ли VitriFreeze / Thaw ES использоваться для бластоцист?

Он может использоваться для эмбрионов на всех этапах.

Витрификация ооцитов

Можно ли использовать набор FertiVit с открытыми носителями?

Да, набор FertiVit допускается использовать с открытыми носителями для витрификации.

Почему на флаконах сред из набора FertiVit крышечки разных цветов?

Набор FertiVit можно использовать для ооцитов и эмбрионов; в зависимости от типа клеток/эмбрионов используются разные среды из набора:
— ооциты: используйте все флаконы сред.
— зиготы: используйте флаконы с серыми крышечками для замораживания, используйте все флаконы сред для размораживания.
— эмбрионы на иных стадиях: используйте только флаконы с серыми крышечками.

Среда для промывания и переноса FertiCult Flushing medium

Содержит ли среда FertiCult Flushing medium феноловый красный?

У нас есть разные варианты среды FertiCult Flushing medium. Стандартная среда не содержит феноловый красный, но есть среда FertiCult Flushing с добавлением рН-маркера.

Необходимо ли добавлять антибиотики к среде FertiCult Flushing medium?

Среда FertiCult Flushing производится в вариантах как с добавлением антибиотика (гентамицин), так и без него. Если Вы предпочитаете добавлять антибиотики самостоятельно, мы рекомендуем добавлять 10 мг гентамицина на литр среды или 100 ЕД пенициллина на миллилитр среды.

Можно ли использовать среду FertiCult Flushing medium для аспирации ооцитов?

Да, Вы можете использовать эту среду для аспирации ооцитов. FertiCult Flushing не содержит гепарин, но Вы можете добавить его. Также Вы можете использовать для аспирации ооцитов среду FertiCult Aspiration medium, которая не требует каких-либо добавок.

Можно ли использовать среду FertiCult Flushing medium для ИКСИ?

Да, Вы можете использовать среду, но следите за тем, чтобы температура среды во время процедуры была близка к температуре тела.

Следует ли предварительно инкубировать среду FertiCult Flushing medium перед использованием?

Перед использованием следует довести среду FertiCult Flushing medium до необходимой температуры. Никогда не помещайте среду FertiCult Flushing в CO2-инкубатор, так как при этом снижается уровень pH примерно до 6,90-6,95.

Как долго можно использовать среду FertiCult Flushing medium после вскрытия флакона?

2 фактора ограничивают срок годности продукта после вскрытия флакона:

  • Обмен газами: влияет на рН,
  • Загрязнение жизнеспособными микроорганизмами.

Мы проводили тесты на вскрытие флаконов наших сред в течение 7 дней и обнаружили, что параметры продукта оставались в пределах установленных требований в течение этого срока, принимая во внимание, что флакон вскрывался в стерильных условиях и среда хранилась при 2-8 °C после открытия.

Какова концентрация человеческого сывороточного альбумина в среде Flushing?

4 г/л, что равно 0,4%.

Может ли произойти капацитация, когда сперматозоиды находятся в промывочной среде?

Да, альбумин действительно может способствовать капацитации.

Может ли среда FertiCult Flushing быть использована для культуры 0 дня?
Нет.