Вопрос 1: Можно ли проводить тест SpermMar Test IgG на отмытых сперматозоидах?
Мы не рекомендуем отмывать сперматозоиды до проведения прямого теста SpermMar Test IgG по нескольким причинам: 1) некоторые среды для промывки сперматозоидов содержат сывороточный альбумин человека (САЧ). САЧ имеет тенденцию к образованию «экрана» вокруг сперматозоидов, который скрывает антитела таким образом, что они не могут быть выявлены с помощью теста; 2) промывка образца спермы приведет к удалению большей части антител, которые могут присутствовать в семенной плазме, что приведет к ложно-отрицательному результату теста.

Вопрос 2: Мы проводим анализ с помощью теста SpermMar Test IgG, следует ли нам также выполнять анализ с помощью теста SpermMar Test IgA?
Некоторые лаборатории в рутинном скрининге используют только тест SpermMar Test IgG, а в случае положительного результата на IgG они проводят анализ и на IgA. Тем не менее, в некоторых случаях пациент с отрицательным результатом на IgG является положительным на IgA.
Таким образом, с клинической точки зрения рекомендуется проводить анализ как с помощью теста SpermMar Test IgG, так и с SpermMar Test IgA. С экономической точки зрения возможен подход с использованием рутинного скрининга только на IgG и проведением теста на IgA в случае положительного результата на IgG.

Вопрос 3: Почему набор SpermMar Test IgG содержит 2 флакона, а SpermMar Test IgA – только 1?
Набор SpermMar Test IgG содержит 1 флакон латексных частиц, покрытых IgG, и 1 флакон анти-IgG антисыворотки. Антисыворотка связывает антитела на поверхности сперматозоида с антителами на поверхности латексных частиц.
Набор SpermMar Test IgA содержит 1 флакон латексных частиц, покрытых моноклональными анти-IgA антителами, напрямую связывающими латексные частицы с антителами на поверхности сперматозоида. Таким образом, в данном наборе требуется лишь 1 флакон реагента, в то время как для набора SpermMar Test IgG требуется 2 флакона.

Вопрос 4: Иногда при проведении теста SpermMar Test IgG в нашей лаборатории сперматозоиды утрачивают подвижность через 15 минут после смешивания реагентов с образцом. Нормально ли это?
Да. После смешивания реагентов с образцом спермы необходимо подождать 3 минуты до подсчета результатов. Не следует ждать более 5 минут

Вопрос 5: При проведении теста SpermMar Test IgG латексные частицы связываются (агрегируют) между собой. Нормально ли это?
Да. Принцип такого эффекта описан в Вопросе 3: антисыворотка связывает латексные частицы не только со сперматозоидами, но и с другими латексными частицами, также содержащими IgG. Это приводит к тенденции латексных частиц к агрегации.
Другой причиной агрегации может быть недостаточно хорошее перемешивание содержимого флакона с латексными частицами до использования в тесте. Также следует обеспечить хорошее перемешивание антисыворотки, латексных частиц и спермы на предметном стекле.

Вопрос 6: Поставляете ли вы положительные или отрицательные контроли для набора SpermMar Test IgG?
Да. Контроли поставляются готовыми к использованию и могут использоваться в непрямом тесте SpermMar Test IgG.

Вопрос 7: Можно ли проводить непрямой тест SpermMar IgG на замороженных/размороженных образцах семенной плазмы?
Да. Рекомендуется провести центрифугирование необработанного (нативного) образца спермы до замораживания семенной плазмы при -18 °С и ниже.

Вопрос 8: В Руководстве ВОЗ указано, что для теста SpermMar Test IgA и SpermMar Test IgG нужно использовать 3,5 мкл реагента, в то время как в ваших инструкциях по применению тестов указано 10 мкл.
Компания FertiPro всегда рекомендовала использовать объем реагента 10 мкл. В Руководстве ВОЗ объем реагента изменен по собственной инициативе авторов. Имеются существенные сомнения, что столь малые объемы реагента (3,5 мкл) обеспечат воспроизводимые и валидные результаты и хорошее смешивание с образцом. Использование 10 мкл реагенты позволяет сохранять объем препарата, обеспечивающий условия для свободного перемещения сперматозоидов.

Вопрос 9: Снижается ли срок годности реагентов SpermMar Test IgG после вскрытия флакона?
Нет, вскрытие (начало использования) реагентов не снижает срок годности. Набор годен в течение всего времени, указанного на этикетке и пачке реагентов.

Вопрос 10: В течение какого времени после забора образца необходимо провести его анализ в тесте SpermMar Test IgG?
Настоятельно рекомендуется проведение анализа образца в течение не более 1-2 часов после забора. В случае, если подвижность сперматозоидов высока, возможно проведение теста в течение 3-4 часов после забора, однако, наличие антиспермальных антител в образце способствует снижению подвижности сперматозоидов.

Вопрос 11: Как хранить образец спермы после забора и до проведения анализа?
Необходимо избегать теплового шока (для поддержания подвижности сперматозоидов). Предпочтительно хранить образец спермы до анализа при температуре 37 °С.

Вопрос 12: Готовы ли реагенты, поставляемые в наборе SpermMar Test IgG, к использованию?
Да, реагенты готовы к использованию. Латексные частицы необходимо перемешать на вихревой мешалке непосредственно перед использованием для получения гомогенной суспензии. Также реагенты должны достичь комнатной температуры до использования (смешивания с образцом) во избежание температурного шока.

Вопрос 13: Какова должна быть температура предметного стекла при проведении теста SpermMar Test IgG?
Комнатная температура.

Вопрос 14: Образец спермы обладает патологической вязкостью. Как отобрать 10 мкл образца для проведения теста SpermMar Test IgG?
Если концентрация и подвижность сперматозоидов в вязком образце являются нормальными: добавьте равный объем среды FertiCult Flushing medium (без альбумина!) (обратитесь к нам по вопросу поставки данной среды), аккуратно перемешайте пипетированием и используйте 10 мкл для теста SpermMar IgG.
Если концентрация и подвижность сперматозоидов в вязком образце являются очень низкими: сконцентрируйте образец центрифугированием, удалите супернатант (семенную плазму) и ресуспендируйте осадок в небольшом объеме среды FertiCult Flushing medium (без альбумина!). Затем используйте 10 мкл отмытых сперматозоидов для теста SpermMar IgG.
Потенциально вязкость образца можно снизить путем механической обработки (осторожное пропускание через шприц с иглой 18G или 19G), но такая обработка может значительно снизить подвижность сперматозоидов.

Вопрос 15: Концентрация сперматозоидов в образце настолько велика, что сложно быстро подсчитать 100 сперматозоидов.
Образец спермы можно разбавить средой FertiCult Flushing medium (без альбумина!).

Вопрос 16: В Руководстве ВОЗ рекомендовано при проведении теста подсчитывать 200 подвижных сперматозоидов, а в инструкции по применению набора FertiPro – 100 сперматозоидов.
При разработке теста мы валидировали его характеристики (в т.ч. пригодности и воспроизводимость) при подсчете 100 сперматозоидов; также подсчет 100 сперматозоидов существенно облегчает работу специалистов клинико-диагностических лабораторий.

Вопрос 17: Можно ли проводить тест SpermMar IgG на цервикальной слизи?
Да, тест SpermMar IgG может использоваться для непрямого МАР-теста на цервикальной слизи. Для проведения такого теста Вам понадобятся положительный и отрицательный контроли для МАР-теста.

Вопрос 18: Набор реагентов SpermMar IgG оставили на столе в лаборатории на выходные. Можно ли использовать набор?
Да. Реагенты набора SpermMar IgG могут храниться до 5 суток при температуре до 37 °С без снижения срока годности.

Вопрос 19: Можно ли оставить набор SpermMar IgG на столе в лаборатории на несколько часов при проведении анализа образцов?
Да, на время проведения анализов реагенты можно хранить при комнатной температуре.

Вопрос 20: Можно ли отобрать аликвоты реагентов SpermMar IgG в пластиковые пробирки (пробирки Эппендорфа)?
Нет, стабильность реагентов значительно ухудшится.

Вопрос 21: Как правильно подсчитать результаты связывания с латексными частицами в тесте?
— Подсчитывать необходимо только подвижные сперматозоиды
— положительными на антиспермальные антитела считаются сперматозоиды, связанные с латексными частицами любой частью, кроме самого кончика жгутика
— с 1 сперматозоидом может связываться большое количество латексных частиц. Положительными на антиспермальные антитела считаются сперматозоиды, с которыми связано 2 и более латексных частиц

Вопрос 22: Образец спермы обладает крайне низкой концентрацией сперматозоидов/низкой подвижностью. Как поступать в таком случае?
При выявлении образца спермы с крайне низкой концентрацией сперматозоидов/низкой подвижностью, рекомендуется:
a. Удостовериться, что сбор образца осуществлен правильно (температура хранения, время хранения до анализа).
b. Собрать новый образец спермы через несколько недель (простуда или иное заболевание может существенно влиять на качество спермы) и повторить анализ
c. Провести дополнительный полный анализ образца спермы в соответствии с руководством ВОЗ:
— Микроскопическое исследование: много ли круглых клеток? Если да, определить концентрацию пероксидаз-положительных белых клеток крови (тест LeucoScreen). Данные клетки оказывают негативное влияние на качество спермы из-за окислительного стресса, что может быть причиной низкой подвижности сперматозоидов.
— Определить жизнеспособность сперматозоидов (напр., тест VitalScreen)
— Провести непрямой МАР-тест на IgG (SpermMar Test IgG)
— Исследовать морфологию сперматозоидов (тест Spermac Stain)
— Измерить содержание маркеров придаточных желез, в особенности альфа-глюкозидазы (индикатор патологии эпидидимуса) – тест EpiScreen Plus

Вопрос 23: Образец спермы обладает крайне низкой концентрацией сперматозоидов/низкой подвижностью. Как поступать в таком случае?
При выявлении образца спермы с крайне низкой концентрацией сперматозоидов/низкой подвижностью, рекомендуется: