Вопрос 1: Можно ли (и необходимо ли) проводить непрямой тест SpermMar Test IgA?
Нет, непрямой тест проводить не следует. Проведение непрямого теста SpermMar Test IgA следует рассматривать в качестве экспериментальной методики, и клиническое значение получаемых результатов не было достоверно установлено

Вопрос 2: Можно ли проводить тест SpermMar Test IgA на отмытых сперматозоидах?
Мы не рекомендуем отмывать сперматозоиды до проведения прямого теста SpermMar Test IgA по нескольким причинам: 1) некоторые среды для промывки сперматозоидов содержат сывороточный альбумин человека (САЧ). САЧ имеет тенденцию к образованию «экрана» вокруг сперматозоидов, который скрывает антитела таким образом, что они не могут быть выявлены с помощью теста; 2) промывка образца спермы приведет к удалению большей части антител, которые могут присутствовать в семенной плазме, что приведет к ложно-отрицательному результату теста.

Вопрос 3: Мы проводим анализ с помощью теста SpermMar Test IgG, следует ли нам также выполнять анализ с помощью теста SpermMar Test IgA?
Некоторые лаборатории в рутинном скрининге используют только тест SpermMar Test IgG, а в случае положительного результата на IgG они проводят анализ и на IgA. Тем не менее, в некоторых случаях пациент с отрицательным результатом на IgG является положительным на IgA.
Таким образом, с клинической точки зрения рекомендуется проводить анализ как с помощью теста SpermMar Test IgG, так и с SpermMar Test IgA. С экономической точки зрения возможен подход с использованием рутинного скрининга только на IgG и проведением теста на IgA в случае положительного результата на IgG.

Вопрос 4: Почему набор SpermMar Test IgG содержит 2 флакона, а SpermMar Test IgA – только 1?
Набор SpermMar Test IgG содержит 1 флакон латексных частиц, покрытых IgG, и 1 флакон анти-IgG антисыворотки. Антисыворотка связывает антитела на поверхности сперматозоида с антителами на поверхности латексных частиц.
Набор SpermMar Test IgA содержит 1 флакон латексных частиц, покрытых моноклональными анти-IgA антителами, напрямую связывающими латексные частицы с антителами на поверхности сперматозоида. Таким образом, в данном наборе требуется лишь 1 флакон реагента, в то время как для набора SpermMar Test IgG требуется 2 флакона.

Вопрос 5: Поставляете ли вы положительные или отрицательные контроли для набора SpermMar Test IgA?
Нет. Тест SpermMar IgA является прямым и проводится на сперматозоидах, возможность поставки контрольных подвижных сперматозоидов отсутствует. Положительные и отрицательные контроли для набора SpermMar IgG содержат плазму, и могут храниться на протяжении длительного времени.

Вопрос 6: В Руководстве ВОЗ указано, что для теста SpermMar Test IgA и SpermMar Test IgG нужно использовать 3,5 мкл реагента, в то время как в ваших инструкциях по применению тестов указано 10 мкл.
Компания FertiPro всегда рекомендовала использовать объем реагента 10 мкл. В Руководстве ВОЗ объем реагента изменен по собственной инициативе авторов. Имеются существенные сомнения, что столь малые объемы реагента (3,5 мкл) обеспечат воспроизводимые и валидные результаты и хорошее смешивание с образцом. Использование 10 мкл реагенты позволяет сохранять объем препарата, обеспечивающий условия для свободного перемещения сперматозоидов.

Вопрос 7: Снижается ли срок годности реагентов SpermMar Test IgA после вскрытия флакона?
Нет, вскрытие (начало использования) реагентов не снижает срок годности. Набор годен в течение всего времени, указанного на этикетке и пачке реагентов.

Вопрос 8: В течение какого времени после забора образца необходимо провести его анализ в тесте SpermMar Test IgA?
Настоятельно рекомендуется проведение анализа образца в течение не более 1-2 часов после забора. В случае, если подвижность сперматозоидов высока, возможно проведение теста в течение 3-4 часов после забора, однако, наличие антиспермальных антител в образце способствует снижению подвижности сперматозоидов.

Вопрос 9: Как хранить образец спермы после забора и до проведения анализа?
Необходимо избегать теплового шока (для поддержания подвижности сперматозоидов). Предпочтительно хранить образец спермы до анализа при температуре 37 °С.

Вопрос 10: Готовы ли реагенты, поставляемые в наборе SpermMar Test IgA, к использованию?
Да, реагенты готовы к использованию. Латексные частицы необходимо перемешать на вихревой мешалке непосредственно перед использованием для получения гомогенной суспензии. Также реагенты должны достичь комнатной температуры до использования (смешивания с образцом) во избежание температурного шока.

Вопрос 11: Какова должна быть температура предметного стекла при проведении теста SpermMar Test IgA?
Комнатная температура.

Вопрос 12: Образец спермы обладает патологической вязкостью. Как отобрать 10 мкл образца для проведения теста SpermMar Test IgA?
Если концентрация и подвижность сперматозоидов в вязком образце являются нормальными: добавьте равный объем среды FertiCult Flushing medium (без альбумина!) (обратитесь к нам по вопросу поставки данной среды), аккуратно перемешайте пипетированием и используйте 10 мкл для теста SpermMar IgA.
Если концентрация и подвижность сперматозоидов в вязком образце являются очень низкими: сконцентрируйте образец центрифугированием, удалите супернатант (семенную плазму) и ресуспендируйте осадок в небольшом объеме среды FertiCult Flushing medium (без альбумина!). Затем используйте 10 мкл отмытых сперматозоидов для теста SpermMar IgA.
Потенциально вязкость образца можно снизить путем механической обработки (осторожное пропускание через шприц с иглой 18G или 19G), но такая обработка может значительно снизить подвижность сперматозоидов.

Вопрос 13: Концентрация сперматозоидов в образце настолько велика, что сложно быстро подсчитать 100 сперматозоидов.
Образец спермы можно разбавить средой FertiCult Flushing medium (без альбумина!).

Вопрос 14: В Руководстве ВОЗ рекомендовано при проведении теста подсчитывать 200 подвижных сперматозоидов, а в инструкции по применению набора FertiPro – 100 сперматозоидов.
При разработке теста мы валидировали его характеристики (в т.ч. пригодности и воспроизводимость) при подсчете 100 сперматозоидов; также подсчет 100 сперматозоидов существенно облегчает работу специалистов клинико-диагностических лабораторий.

Вопрос 15: Можно ли проводить тест SpermMar IgA на замороженных/размороженных образцах спермы?
Тест SpermMar IgA можно проводить на надлежащим образом замороженных в жидком азоте и размороженных сперматозоидах. Тем не менее, данная процедура может снизить подвижность и жизнеспособность сперматозоидов, что отразится на результатах теста SpermMar IgA. Также, если в среде для замораживания присутствует альбумин, это может повлиять на результаты теста.

Вопрос 16: Можно ли проводить тест SpermMar IgA на цервикальной слизи?
Нет, тест SpermMar IgA не может использоваться для непрямого МАР-теста. При необходимости анализа цервикальной слизи используйте тест SpermMar IgG.

Вопрос 17: Набор реагентов SpermMar IgA оставили на столе в лаборатории на выходные. Можно ли использовать набор?
Да. Реагенты набора SpermMar IgA могут храниться до 5 суток при температуре до 37 °С без снижения срока годности.

Вопрос 18: Можно ли оставить набор SpermMar IgA на столе в лаборатории на несколько часов при проведении анализа образцов?
Да, на время проведения анализов реагенты можно хранить при комнатной температуре.

Вопрос 19: Можно ли использовать набор SpermMar IgA для анализа семенной плазмы?
Нет, проведение анализа на семенной плазме не рекомендуется, поскольку не доказана эффективность/значимость такого анализа.

Вопрос 20: Можно ли отобрать аликвоты реагента SpermMar IgA в пластиковые пробирки (пробирки Эппендорфа)?
Нет, стабильность реагента значительно ухудшится.

Вопрос 21: Как правильно подсчитать результаты связывания с латексными частицами в тесте?
— Подсчитывать необходимо только подвижные сперматозоиды
— положительными на антиспермальные антитела считаются сперматозоиды, связанные с латексными частицами любой частью, кроме самого кончика жгутика
— с 1 сперматозоидом может связываться большое количество латексных частиц. Положительными на антиспермальные антитела считаются сперматозоиды, с которыми связано 2 и более латексных частиц

Вопрос 22: Образец спермы обладает крайне низкой концентрацией сперматозоидов/низкой подвижностью. Как поступать в таком случае?
При выявлении образца спермы с крайне низкой концентрацией сперматозоидов/низкой подвижностью, рекомендуется:
a. Удостовериться, что сбор образца осуществлен правильно (температура хранения, время хранения до анализа).
b. Собрать новый образец спермы через несколько недель (простуда или иное заболевание может существенно влиять на качество спермы) и повторить анализ
c. Провести дополнительный полный анализ образца спермы в соответствии с руководством ВОЗ:
— Микроскопическое исследование: много ли круглых клеток? Если да, определить концентрацию пероксидаз-положительных белых клеток крови (тест LeucoScreen). Данные клетки оказывают негативное влияние на качество спермы из-за окислительного стресса, что может быть причиной низкой подвижности сперматозоидов.
— Определить жизнеспособность сперматозоидов (напр., тест VitalScreen)
— Провести непрямой МАР-тест на IgG (SpermMar Test IgG)
— Исследовать морфологию сперматозоидов (тест Spermac Stain)
— Измерить содержание маркеров придаточных желез, в особенности альфа-глюкозидазы (индикатор патологии эпидидимуса) – тест EpiScreen Plus