Главная / IMCS / Коллекция высокоактивных, очищенных рекомбинантных сульфатаз Sulfazyme™

Коллекция высокоактивных, очищенных рекомбинантных сульфатаз Sulfazyme™

Линейка продуктов Sulfazyme™ (EC 3.1.6.1) включает очищенные рекомбинантные и генно-модифицированные арилсульфатазы, разработанные для гидролиза определённых сульфатированных соединений при 37 °C. Sulfazyme гидролизует β-связанные сульфатные эфирные группы из метаболитов, образующихся в процессе фазы II детоксикации в печени.

Выберите между оригинальным Sulfazyme™ PaS для общих потребностей в сульфатазах или любым из наших генно-модифицированных вариантов для гидролиза устойчивых стероидных субстратов, таких как дегидроэпиандростерон-сульфат (DHEAS), болденон-сульфат и тестостерон-сульфат.

Альтернатива кислотному гидролизу

Sulfazyme™ является отличной альтернативой кислотному гидролизу при анализе соединений, содержащих сульфатные эфирные группы. Сильный кислотный гидролиз может привести к деградации аналитов или увеличению матричных интерференций, что, в свою очередь, может искусственно исказить результаты. Кроме того, Sulfazyme™ можно использовать в сочетании с нашим продуктом β-глюкуронидазы для одновременного анализа глюкуронидированных и сульфатированных метаболитов. Пожалуйста, свяжитесь с нами, чтобы узнать больше.

Варианты Sulfazyme™

Sulfazyme™ PaS

Sulfazyme™ DS

Sulfazyme™ β-AS

Почему стоит использовать Sulfazyme™ PaS?

Большинство коммерчески доступных сульфатаз получают из организмов, таких как улитки, морские блюдечки или морские ушки, которые могут содержать мешающие метаболиты и ферментативные активности, приводящие к неточным результатам. Sulfazyme™ PaS является рекомбинантным ферментом с чистотой более 90 %. Этот фермент демонстрирует исключительно сульфатазную активность, обеспечивая высокоспецифичный и точный гидролиз.

Сравнение активности Sulfazyme™ PaS с другими сульфатазами

Sulfazyme™ PaS гидролизует выбранные сульфатированные соединения с более высокой активностью по сравнению с другими коммерчески доступными сульфатазами. Уровни активности других сульфатаз были получены из данных, представленных в литературе.

Рисунок 1. Хромогенные анализы для определения относительной активности Sulfazyme и сырого фермента улитки (Helix pomatia).
(a) Активность глюкуронидазы с использованием фенолфталеинглюкуронида при 25 °C.
(b) Активность сульфатазы с использованием пара-нитрокатехолсульфата при 37 °C.
(c) Активность эстеразы с использованием Calcein-AM при 37 °C. Относительная активность определялась нормированием по наименьшему значению активности.

[По материалам: Sitasuwan N, McGee A, Lee LA. (2019). Hydrolysis of sulfated steroids, toxic endobiotics and xenobiotics using purified sulfatase for quantitation of sulfated and unconjugated compounds. Материалы 67-й конференции ASMS по масс-спектрометрии и смежным темам, Атланта, Джорджия, 2–6 июня 2019 г.]

Рисунок 2. Профили гидролиза сульфатированных метаболитов в течение 24 часов при известных концентрациях.
(a) Сульфат кортизола в синтетической моче (Surine™), инкубированный с Sulfazyme.
(b) Сульфат тапентадола в синтетической моче (Surine™), инкубированный с Sulfazyme.
(c) Сульфат тапентадола в человеческой плазме, инкубированный с Sulfazyme.

Другое исследование сравнивало эффективность деконъюгации трёх ферментов при гидролизе метаболитов тербуталина в образцах мочи человека. IMCSzyme® и Sulfazyme™ PaS (обозначенный в статье как IMCS-PSF) сравнивались с β-глюкуронидазой Helix pomatia (Sigma). Образцы мочи были собраны у здоровых добровольцев до и после перорального приёма таблеток тербуталина. Образцы подвергались воздействию четырёх различных условий смешивания фермента и образца (см. Таблицу 1). Это исследование показало, что Sulfazyme™ PaS демонстрирует более высокую эффективность гидролиза по сравнению с другими ферментами, обычно используемыми для анализа тербуталина.

Рисунок 3. Сравнение временного профиля гидролиза метаболитов тербуталина при гидролизе без фермента, с использованием IMCSzyme, IMCS-PSF (Sulfazyme PaS) и сырого фермента. Данные представлены как среднее ± стандартное отклонение (n = 3). ***p ≤ 0.001 — по результатам ANOVA.
ANOVA: дисперсионный анализ; SD: стандартное отклонение.

[По материалам: Wang FR, Fei J, Yu XL, Zhao XC, Wang Q, Metavarayuth K. (2018). Advancing the Analysis of Terbutaline in Urine Samples Using Novel Enzyme Hydrolysis. Bioanalysis. doi: 10.4155/bio-2018-0145.]

При использовании в сочетании с IMCSzyme®, Sulfazyme способствует более быстрому и эффективному обнаружению конъюгированных метаболитов, которые в противном случае было бы трудно выявить с помощью масс-спектрометрии.

Комбинирование IMCSzyme и Sulfazyme PaS позволяет быстро обнаруживать фенил-γ-валеролактоны (PVLs) в моче. Традиционный метод требует 6 часов, тогда как гидролиз с использованием комбинированных ферментов IMCSzyme и Sulfazyme занимает всего 30 минут².

²Lessard-Lord J., Auger S., Plante P-L., Picard P., Dudonné S., Desjardins Y. (2021). Ultra-fast determination of the capacity to degrade proanthocyanidins from cranberries into phenyl-γ-valerolactones by Luxon-MS/MS. Материалы 69-й конференции ASMS по масс-спектрометрии и смежным темам, Филадельфия, Пенсильвания. 31 октября – 4 ноября 2021 г.

Примеры применения

Гидролиз сульфатированных метаболитов: Профили гидролиза до 24 часов с использованием Sulfazyme™ показали эффективный гидролиз кортизол-сульфата и тапентадол-сульфата в синтетической моче и человеческой плазме.
Сравнение эффективности деконъюгации: Исследование сравнивало эффективность деконъюгации трёх ферментов для гидролиза метаболитов тербуталина в образцах человеческой мочи. Sulfazyme™ PaS показал более высокую эффективность гидролиза по сравнению с другими ферментами, обычно используемыми для анализа тербуталина.
Совместное использование с IMCSzyme®: При совместном использовании с IMCSzyme®, Sulfazyme™ способствует более быстрому и эффективному обнаружению конъюгированных метаболитов, которые в противном случае было бы трудно обнаружить с помощью масс-спектрометрии.