ООО "Селл Диагностик"

EngАдрес офиса: 220040, г. Минск, ул. Максима Богдановича, д.120, пом. 5 Пн.-Пт.: 09:00 - 18:00

+375 29 3 911 690

Запуск эксперимента

До начала эксперимента рекомендуется попрактиковаться на воде с целью отработки действий (особенно в части удаления пузырьков)


Требуемые для сосуда краны и шприцы — Luer lock (порты имеют крепления Луэр лок)


Рекомендуется не помещать в сосуд клетки сразу после размораживания: отклик/культивирование будет не таким хорошим, чем если бы сначала прокультивировать их во флаконах, трипсинизировать, а затем поместить в реактор (из-за температурного шока клетки не так хорошо агрегируют в сфероиды)          


Сосуд необходимо полностью заливать жидкостью (средой, клетками)


«Переместите сосуд в вытяжной шкаф с ламинарным потоком. Поместите заглушку порта для наполнения на стерильный тампон, пропитанный спиртом.» Какой стороной класть заглушку на тампон ?

Внутренней (затыкающей) частью на спирт (требуется во избежание контаминации).


Какие требования к спиртовому содержанию тампона ?

Этанол/изопропанол.

Также тампон может понадобиться в случае, если коснуться порта (или иной поверхности, контактирующей с клетками) пальцами: если есть сомнения о возможности контаминации – лучше протереть место касания тампоном.


«Прикрепите стерильные краны (клапаны) к портам для шприцев.» — Можно ли использовать трехходовый кран вместо двухходового ?

Да, можно.


«Частично заполните сосуд средой, оставив достаточно места для добавления клеток и скаффолдов или микроносителей.» – насколько много среды заливать ?

Нет жестких требований/ограничений. Зависит от того, каков объем добавляемой потом клеточной суспензии.


Через какой порт заливать среду? Чем допускается заливать среду (пипеткой, шприцем…) ?

Через порт для наполнения. Заливать можно пипеткой или шприцем. Главное – не касаться оксигенаторного ядра !


Через какой порт заливать среду в HARV-4 ?

Через шприцевый порт. Только шприцем (второй кран должен быть открыт!)


« Добавьте клетки. При желании, клетки и микроносители можно смешивать и добавлять вместе..» — через какой порт добавлять клетки ?

Через порт для наполнения.

Если используются каркасы/носители: рекомендуется перемешать клетки и носители и добавлять их вместе.

Допускается добавление клеток через порты для шприцев (с помощью шприца), в т.ч. для больших сосудов HARV и для сосудов STLV.


«Заполните оставшийся объем сосуда средой и вставьте заглушку порта для наполнения.» – заливать средой необходимо до самого края ?

Да, как только можно больше, но так, чтобы не перелить через край, и так, чтобы затем стала заглушка порта для наполнения.


«Удаление пузырька.»

При удалении пузырьков лучше делать это достаточно медленно.

Под каждым портом есть вогнутая область, и пузырек может там задерживаться, откуда его и выдавливают шприцем.

В случае, если в сосуде образовались пузырьки воздуха, прикрепленные к оксигенаторной мембране или к стенкам сосуда, для их удаления можно открутить сосуд от роторной базы, взять в одну руку сосуд, а другой рукой резко хлопнуть по нему.


Можно ли переворачивать сосуд набок/вверх ногами, чтобы убедиться, что не осталось пузырьков воздуха ?

Да, можно, но делать это следует осторожно.


какого объема шприц использовать для удаления пузырьков:

            — HARV-4

            — HARV-10

            — HARV-50

            — STLV-110

            — STLV-250

Обычно максимальный объем пузырька – несколько мл, поэтому 3-5 мл шприц подходит для всех размеров сосудов. Но если сосуд был недостаточно заполнен средой через порт для наполнения (на предыдущих этапах подготовки), то можно использовать и шприцы большего объема.

При удалении пузырьков шприцем необходимо контролировать, чтобы не ввести воздух в сосуд шприцем (шприц должен быть заполнен достаточным объемом среды).

Окончательное (безвоздушное) заполнение сосуда до краев средой обеспечивается именно введением среды с помощью шприца при выдавливании пузырьков.

После завершения удаления пузырьков и откручивания шприцев от кранов рекомендуется удалить остатки культуральной среды из кранов : 


« Прикрепите сосуд к роторной базе.» — насколько плотно прикручивать сосуд к базе ?

Необходимо без усилий прикручивать сосуд до тех пор, пока он не сядет на ротор плотно (пока прикручивание без усилий не остановится). Затем приложить немного силы, чтобы закрепить сосуд чуть-чуть плотнее (убедиться, что сосуд сидит крепко) – если сосуд не будет прикручен плотно, при вращении он может открутиться. Тем не менее, важно не перетягивать крепление с излишней силой !