Сосуды HARV

При использовании сосудов HARV следует быть предельно осторожным при использовании пипеток, погружаемых в порт для наполнения! Ни в коем случае нельзя касаться острыми предметами (в т.ч. пластиковой пипеткой, пастеровской пипеткой, шприцем…) поверхности мембраны (внизу сосуда, на нижней половине).

«У меньших сосудов нет порта для наполнения. Соответственно, наполнение этих сосудов должно осуществляться через порты для шприцев.»

При заполнении сосудов HARV-4 мл следует сразу накрутить двухходовые краны для подсоединения шприцев. При заполнении сосуда второй кран должен быть открыт для обеспечения выпуска воздуха.

Заполнять HARV нужно только шприцем, или можно пипеткой ?

Большие сосуды HARV, в который есть порт для наполнения, можно заполнять пипеткой (но можно и через порт для шприцев).

Малые HARV: заполнение проводится только шприцем.

Можно ли добавлять в сосуд HARV малого объема сразу клетки, смешанные с культуральной средой (вместо последовательного добавления в сосуд сначала культуральной среды, а затем клеточной суспензии) ?

Да, можно, решение за пользователем. Д-р Навран добавляет клетки в культуральной среде сразу (напр., объемом четь меньше 4 мл для сосуда HARV-4).

Как заменять культуральную среду в больших сосудах HARV (с портом для наполнения) ?

Ставить сосуд необходимо вертикально (на бок) так, чтобы порт для наполнения был в самой высокой точке (для того, чтобы клетки соскользнули вниз, в сторону, противоположную от порта для наполнения.

Затем наклонить сосуд под небольшим углом, и удалять среду пипеткой через порт для наполнения, осторожно поворачивая сосуд (чтобы отобрать больше среды). Тем не менее, отобрать для освежения всю среду из сосуда невозможно без отбора клеток (возможно отобрать около 2/3 среды). Ни в коем случае нельзя касаться острыми предметами (в т.ч. пластиковой пипеткой, пастеровской пипеткой) поверхности оксигенаторной мембраны.

Как заменять культуральную среду в малых сосудах HARV (без порта для наполнения) ?

Все содержимое сосуда необходимо отобрать с помощью шприца, а затем опустошить шприц в стерильную пробирку. Подождать, пока клетки/сфероиды не осядут на дно пробирки. Затем осторожно аспирировать старую среду сверху клеток, и добавить новую среду. После этого с помощью шприца ввести клетки и среду обратно в сосуд, и удалить любые возникшие пузырьки.