Главная / Часто задаваемые вопросы Synthecon / Отбор клеток после культивирования

Отбор клеток после культивирования

Оксигенаторная мембрана: ни в коем случае не касаться ее пипеткой (будет прокол — протекание)

«Подвергая сосуд сильному вакууму, с усилием вытягивая поршни шприцев, прикрепленных к портам, можно разорвать мембрану оксигенатора и потребует ее замены»

Необходимо открывать второй кран (для обеспечения притока воздуха для замещения жидкости в нем газом) при отборе среды/клеток из сосуда с помощью шприца из первого крана. Не допускается герметизация/создание сильного вакуума !!!

Порт для наполнения (Fill port):

предназначен для добавления среды/клеток и аспирации среды/клеток (в STLV и больших HARV (50 мл, 10 мл). Не обязательно использовать шприцевые порты для удаления всей среды/отбора клеток.

Малые HARV: отбор осуществляется только шприцем. Можно использовать 5-мл шприц для извлечения среды (всего объема) из крана. Второй кран при этом необходимо открывать для доступа воздуха.

Из какого отверстия в STLV отбирать клетки? Чем отбирать? И надо ли наклонять (и на какой угол) сосуд для того, чтобы отобрать клетки ?

Отбирать клетки – из Порта для наполнения: можно отбирать 10-мл пипеткой (размер подходит) (но для сосудов большого объема потребуется много повторений). При это ни в коем случае нельзя касаться пипеткой оксигенаторной мембраны (центрального ядра)! Пипетку можно погружать на всю глубину сосуда – до дна.

Также можно (и легче) использовать 50-мл (или меньшего объема) шприцы для отбора через шприцевые порты – это, вероятно, наиболее простой способ отбора. При отборе клеток с помощью шприца необходимо будет перевернуть сосуд и одновременно вытягивать поршень шприца (чтобы жидкость сливалась в шприц в т.ч. с помощью гравитации). Второй кран при этом необходимо открывать для доступа воздуха.

Также можно, например, при необходимости, удалить ¾ среды через порт для наполнения, а остальное (вместе с клетками) забрать с помощью шприца (в этом случае будет потеря небольшой части агрегатов/клеток, плавающих выше основной массы клеток/агрегатов).

Из какого отверстия в HARV отбирать клетки ?

Малые HARV (4 мл, 1 мл): отбор осуществляется только шприцем через шприцевый порт. Можно использовать 5-мл (10-мл) шприц для отбора среды с клетками (всего объема) из крана. Второй кран при этом необходимо открывать для доступа воздуха.

Большие HARV (50 мл, 10 мл): для отбора клеток можно использовать Порт для наполнения (предназначен для добавления среды/клеток и аспирации среды/клеток) пипеткой (10 мл). Не обязательно использовать шприцевые порты для удаления всей среды. При это ни в коем случае нельзя касаться пипеткой оксигенаторной мембраны !

Нужно ли наклонять (и на какой угол) сосуд для того, чтобы отобрать клетки ?

Да, нужно немного наклонять сосуд, чтобы клетки переместились под пипетку.

Как извлечь из сосуда эксплантат, если он большого размера ?

Шприц вряд ли подойдет для извлечения эксплантата. Д-р Навран: наклонить сосуд так, чтобы эксплантат оказался под портом для заполнения, и «выловить» эксплантат щипцами (осторожно! Нельзя повреждать мембрану!)

Альтернативно можно подсоединить вакуумную линию к пастеровской пипетке, и «присосать» эксплантат к кончику пипетки, чтобы извлечь его из сосуда.

Сосуд HARV-4 вряд ли будет оптимальным для культивирования эксплантата, а больше предназначен для культивирования редких клеток (малых количеств).

Как извлекать сфероиды из сосуда ? Позволит ли диаметр сфероидов после культивирования в сосуде отобрать их с помощью шприца ?

Если диаметр сфероидов больше 200-300 мкм, то, вероятно, они будут иметь некротическое ядро (слишком большие сфероиды). В этом случае, для уменьшения размера сфероидов, следует или использовать STLV (получаемые сфероиды – меньшего диаметра), или снизить концентрацию клеточного посева (с 10⁵).

БОльшая часть сфероидов, получаемых в сосудах, имеет диаметр около 100-150 мкм, и они легко проходят через шприц при отборе.

Можно ли по завершению эксперимента сливать клетки через шприцевый порт (без использования шприцев/пипеток) при открытом втором кране ?

Да, это можно делать, но необходимо учитывать, что весьма возможна контаминация клеток (из-за касания внешних поверхностей) – нарушение стерильности. Внешние поверхности рекомендуется протереть стерильным спиртовым тампоном до этого, но гарантировать стерильность и в этом случае невозможно.