Важна концентрация (клеток/мл): если пытаемся вызвать агрегацию клеток – Синтекон рекомендует добавлять 105 клеток/мл. Безусловно, это зависит от типа клеток (напр.: определенные клетки требуют больше кислорода), но в целом для получения сфероидов требуется 105 клеток/мл для относительно быстрого формирования хороших сфероидов. Сначала будет много маленьких сфероидов, и они будут расти со временем. Со временем сфероиды стабилизируются в размере, поскольку приходят к моменту, когда не могут эффективно транспортировать кислород в центр сфероида.

 

Если используются каркасы – вероятно, можно использовать меньшую концентрацию.

 

Слишком большая концентрация клеток: сфероиды вырастут слишком большими, и могут получить гипоксию в центре, т.е. получится некротическое ядро при слишком большом размере (даже наблюдалась агрегация всех клеток в один гигантский комок), что может привести к смерти культуры. Это универсальная рекомендация для всех объемов сосудов.

 

Больший объем сосудов: для получения большего числа сфероидов. Очень маленькие сосуды: для редких клеток (получаемых в небольших количествах), т.к. малое число клеток никогда не сформирует агрегаты/сфероиды из-за разбавления. Напр., 1 мл: часто используют для стволовых клеток. Можно, например, последовательно инкубировать сначала в сосуде малого объема, затем переносить в сосуд большего объема.

 

HARV формирует сфероиды несколько большего размера, чем STLV. В STLV оксигенаторное ядро не позволяет формировать большие агрегаты в центре. Т.е. если, например, в HARV агрегаты слишком большие, можно перейти на STLV, чтобы получить меньшего диаметра, более однородные сфероиды, чем в HARV (есть статья об этом на эмбриональных стволовых клетках).