ООО "Селл Диагностик"

EngАдрес офиса: 220040, г. Минск, ул.Некрасова, д.35, корп. 1, пом. 1Н Пн.-Пт.: 09:00 - 18:00

+375 29 3 911 690

Инстаграм Ютуб канал

Cколько клеток добавлять в сосуд первоначально (концентрация) ?

Важна концентрация (клеток/мл): если пытаемся вызвать агрегацию клеток – Синтекон рекомендует добавлять 105 клеток/мл. Безусловно, это зависит от типа клеток (напр.: определенные клетки требуют больше кислорода), но в целом для получения сфероидов требуется 105 клеток/мл для относительно быстрого формирования хороших сфероидов. Сначала будет много маленьких сфероидов, и они будут расти со временем. Со временем сфероиды стабилизируются в размере, поскольку приходят к моменту, когда не могут эффективно транспортировать кислород в центр сфероида.
 
Если используются каркасы – вероятно, можно использовать меньшую концентрацию.
 
Слишком большая концентрация клеток: сфероиды вырастут слишком большими, и могут получить гипоксию в центре, т.е. получится некротическое ядро при слишком большом размере (даже наблюдалась агрегация всех клеток в один гигантский комок), что может привести к смерти культуры. Это универсальная рекомендация для всех объемов сосудов.
 
Больший объем сосудов: для получения большего числа сфероидов. Очень маленькие сосуды: для редких клеток (получаемых в небольших количествах), т.к. малое число клеток никогда не сформирует агрегаты/сфероиды из-за разбавления. Напр., 1 мл: часто используют для стволовых клеток. Можно, например, последовательно инкубировать сначала в сосуде малого объема, затем переносить в сосуд большего объема.
 
HARV формирует сфероиды несколько большего размера, чем STLV. В STLV оксигенаторное ядро не позволяет формировать большие агрегаты в центре. Т.е. если, например, в HARV агрегаты слишком большие, можно перейти на STLV, чтобы получить меньшего диаметра, более однородные сфероиды, чем в HARV (есть статья об этом на эмбриональных стволовых клетках).