Вопрос 1: Является ли метод EpiScreen Plus идентичным методу ВОЗ?
Мы внесли некоторые существенные изменения в продукт:
А) Метод ВОЗ использует кастаноспермин для коррекции фона. Кастаноспермин заменен глюкозой, которую можно хранить при комнатной температуре (против -20 °C) и которая имеет гораздо большую стабильность.
В) Проблемы с растворимостью с одним из буферов, описанными в руководстве ВОЗ, были решены, что привело к получению очень стабильного и надежного продукта.

Вопрос 2: Можем ли мы измерить образцы с помощью спектрофотометра, используя кюветы?
Да, возможно, но есть одно важное различие между приборами: нужно учитывать, что длина пути кювет больше (чаще всего 1 см), чем у микротитровальных планшетов (обычно 0,5 см). Согласно закону Ламберта-Беера (коэффициент поглощения = коэффициент экстинкции х длина пути × концентрация) оптическая плотность (ОП) будут примерно в 2 раза выше. Поэтому самые высокие стандарты 4-нитрофенола будут находиться вне диапазона измерения спектрофотометра. Однако, исходя из нашего опыта, линейность стандартной кривой может быть гарантирована до 100 мкМ. Эта концентрация соответствует активности нейтральной форме фермента 47,9 мМЕ/мл, которая превышает предельную величину. Если активность выше 47,9 мМЕ/мл, мы рекомендуем разбавить и повторно протестировать образец.

Вопрос 3: Можем ли мы использовать обычный инкубатор для анализа?
Образцы должны быть инкубированы при 37 °C, чтобы обеспечить оптимальную активность фермента. Поэтому мы советуем использовать термошейкер или ванну с теплой водой, где образцы находятся в непосредственном контакте с нагретой средой. Для этой цели не подходит стандартный инкубатор клеточных культур, поскольку перенос тепла через воздух происходит медленнее, что приводит к субоптимальным условиям реакции.

Вопрос 4: Нужно ли строить стандартную кривую для каждого теста?
Да.

Вопрос 5: Как вычислять значение альфа-глюкозидазы?
Нами разработан и опубликован шаблон MS Excel ™ для автоматической обработки данных.

Вопрос 6: Есть ли контроли для набора EpiScreen Plus?
Можно купить альфа-глюкозидазу или мальтазу производства Sigma.

Вопрос 7: Нужна ли контрольная проба для каждого образца спермы в наборе EpiScreen Plus?
Да.

Вопрос 8: Может ли для тестов EpiScreen Plus, Citric Acid и Fructose использовать замороженную / размороженную сперму (центрифугирование после замораживания / размораживания)?
Да.

Вопрос 9: Каков срок годности EpiScreen Plus после открытия?
Не влияет на срок хранения, если продукт правильно используется.