Вопрос: На какое количество анализов рассчитан набор Spermac Stain?

Набор красителей во флаконах объемом 50 мл (SPS050) рассчитан на 120-200 мазков, в зависимости от интенсивности использования, времени использования и условий хранения (защита от испарения).

Вопрос: Какова причина смещения критерия «нормальности» морфологии сперматозоидов от 14% к 4% в последнем издании руководства ВОЗ?

В прошлом тератозооспермия обычно диагностировалась при наличии <30% морфологически нормальных сперматозоидов в образце спермы (по руководству ВОЗ) или при наличии <15% (по строгим критериям).

В отличии от 4-го издания руководства ВОЗ, в 5-м издании референтные значения основаны на результатах большого исследования (референтная популяция: отцы, более 1600 пар, несколько центров на разных континентах). Также более ранние издания руководства ВОЗ приводили «нормальные значения», в то время как в 5-м издании приведены «нижние референтные значения». Нельзя отрицать, что в последнее время наблюдается тенденция ухудшения морфологических показателей спермы, что может быть объяснено 3 различными причинами:

• Более строгое применение критериев оценки (ранее пограничные сперматозоиды рассматривались в качестве нормальных, в то время как сейчас они считаются аномальными)
• Более высокая частота выявления (больший процент) мужчин, обладающих пониженным (плохим) репродуктивным здоровьем, как следствие влияния факторов окружающей среды (воздействие псевдоэстрогенов, токсичная окружающая среда, профессиональные вредные факторы, более высокая частота ЗППП, которые индуцируют лейкоцитоспермию и повышение повреждений ДНК).
• Дополнительные параметры морфологической аномальности сперматозоидов, что приводит к классификации большего числа форм в качестве «аномальных».

Вопрос: Какова стандартная практика в (большинстве) европейских лабораторий: используют ли они 4%, или предпочитают использовать 14%?

В соответствии с ежегодным отчетом, публикуемым WIV (Бельгийский научный институт общественного здоровья), 85 из 105 бельгийских андрологических лабораторий применяют руководство ВОЗ 2010 года (5-е издание). Это означает, что 20 лабораторий используют иные критерии: 7 из них используют 15% в качестве пограничного значения, 8 – используют 14%, 1 – 10%, 1 -5%, 1 – 3.9%, 2 – 3% в качестве пограничного значения.

4% является нижним референтным значением. Во время конференции ESHRE 2016 (в рамках семинаров по андрологии и мужскому бесплодию) было отмечено, что многие центры применяют следующую классификацию (которую можно рекомендовать для применения и в РБ):

0-4% — плохой прогноз
4-14% — хороший прогноз
>14% — морфологически нормальная сперма

Вопрос: Каково дерево принятия решений для врача при получении результатов морфологической оценки спермы?

Анализ спермы сам по себе не может прогнозировать фертильность (существует множество относящихся к женщине факторов, независимых от спермы, а также много иных независимых факторов, например, время проведения полового акта по отношению к овуляции). Анализ спермы информативен в отношении проблем мужского репродуктивного здоровья, но для прогноза фертильности пары и/или назначения подходящего лечения результаты анализа спермы следует интерпретировать в комбинации с результатами иных анализов спермы и результатами клинических исследований. Морфология сперматозоидов дает, например, следующую информацию:

• Отсутствие акросомы: структурный дефект -> оплодотворение возможно только через ИКСИ.
• Скрученный хвост: старение спермы -> пациенту следует более часто иметь половые акты.
• Коническая форма головки: ассоциировано с тестикулярным стрессом -> необходимо обследование на предмет варикоцеле или выявления причины тестикулярного стресса.
• Большое количество круглых клетоr, НЕ ЯВЛЯЮЩИХСЯ белыми клетками крови, а сперматидами -> может указывать на слишком короткий период воздержания.

Использование набора для оценки морфологии сперматозоидов Spermac Stain (FertiPro) является значительно менее времязатратным по сравнению со многими другими методиками окрашивания (например, по Папаниколау).

Вопрос: Может ли Spermac Stain помочь определить вакуоли в голове спермы?

В человеческой сперме есть два типа вакуолей, один из которых является нормой как результат расположения ДНК в головке, и его можно увидеть только при электронной микроскопии. Другой тип – это тип, называемый дефектом «диадем». Эти вакуоли обычно расположены в экваториальной области, они могут быть одиночными, но, когда они множественные, они часто находятся на одной линии, напоминающей диадему или корону, окружающую головку.

Вакуоли образуются путем инвагинации ядерной мембраны в ядро и, таким образом, окружены ядерной мембраной. Они могут быть пустыми или заполненными различными цитоплазматическими компонентами, мембранным, зернистым или везикулярным материалом. Эти вакуоли являются патологическими, являясь одним из основных дефектов головки, и они хорошо видны при окраске Spermac Stain, но не другими имеющимися красителями. Их также можно увидеть при фазово-контрастной микроскопии. Лучший способ увидеть их – увеличивать и уменьшать четкость и вакуоль меняет цвет с черного на белый. Данный дефект часто встречается в сочетании с другими дефектами.

Вопрос: Где находиться «экваториальная область» сперматозоида?

Экваториальная область является самой широкой частью головки сперматозоидов, чуть ниже акросомы (у морфологически нормальных сперматозоидах).

Вопрос: Как обрабатывать образцы спермы с патологической вязкостью при подготовке к проведению теста Spermac Stain?

Добавьте к нативному образце спермы равный объем среды FertiCult Flushing medium (среда для промывки сперматозоидов), аккуратно перемешайте пипеткой.
Примечание: разбавление образца спермы средой FertiCult Flushing medium не влияет на окрашивание сперматозоидов при оценке морфологии сперматозоидов с помощью набора Spermac Stain. Использование FertiCult Flushing medium допускается.

Высокая вязкость может препятствовать правильному определению подвижности сперматозоидов, концентрации, определению сперматозоидов, покрытых антителами, и измерению биохимических маркеров. Весь образец спермы обычно разжижается в течение 15 мин при комнатной температуре, хотя редко разжижение может занимать до 60 мин и более.

Отсутствие разжижения может являться признаком недостаточной секреции простатой протеолитических ферментов фибринолизина, фибриногеназы и аминопептидазы. С другой стороны, отсутствие коагуляции может указывать на обструкцию эякуляторного протока или врожденное отсутствие семенных пузырьков. Важно отметить, что разжижение следует отличать от вязкости, поскольку аномалии в вязкости могут быть результатом нарушения функции простаты и / или использования пластикового контейнера неподходящего типа.

Рекомендуется также ознакомиться с рекомендациями Руководства ВОЗ по исследованию и обработке эякулята человека, 2010 г., при планировании и проведении работы с вязкими образцами эякулята.
Альтернативные варианты работы с патологически вязкими неразжижаемыми образцами спермы (в соответствии с Руководством ВОЗ):

1) Добавьте к образцу спермы равный ему объем физиологической среды (фосфатно-солевой буфер, физ.раствор), тщательно пропипетируйте
2) (или) Негомогенность образца может быть снижена путем многократного (6-10 раз) осторожного пропускания образца через шприц с тупой иглой размера 18G или 19G
3) (или) добавление бромелайна, протеолитического фермента с широкой специфичностью. Приготовьте раствор 10 МЕ/мл бромелайна в ФСБ. Бромелайн плохо растворяется, но при перемешивании растворение происходит через 15-20 мин. Разбавьте образец спермы 1:1 раствором 10 МЕ/мл бромелайна, перемешайте наконечником пипетки, инкубируйте при 37°С в течение 10 мин. Тщательно перемешайте образец перед анализом.

Вопрос: Может ли краситель Spermac Stain использоваться для дифференциации лейкоцитов / круглых клеток?

Нет, только для оценки морфологии.

Вопрос: Можно ли использовать Spermac Stain для оценки жизнеспособности сперматозоидов?

Нет, нельзя. Вы должны использовать краситель на основе эозина (тест VitalScreen).